两种不同假单胞菌海藻糖合成途径的基因克隆开题报告

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1. 研究目的与意义

海藻糖是由两个葡萄糖残基通过半缩醛羟基相结合的一种非还原性二糖。

因为海藻糖没有游离的醛基，所以其化学性质很稳定，具有独特的不同于其它双糖的生物学特性。

海藻糖广泛分布于细菌、真菌和动植物体内，研究证明海藻糖可以保护生物组织和维持细胞的活力，它可以作为高效的保护剂有效地稳定细胞膜和蛋白质的结构，使得生物体能够在诸如高温、脱水、辐射、有毒试剂等恶劣环境条件下仍然保持细胞内湿润，防止细胞受到损伤。

2. 国内外研究现状分析

2.1海藻糖的性质海藻糖又称漏芦糖、蕈糖等。

是一种安全、可靠的天然糖类。

海藻糖是由两个葡萄糖分子以1,1-糖苷键构成的非还原性糖[1]。

3. 研究的基本内容与计划

1 研究内容

1.构建重组质粒petduet-trey-trez：通过查阅文献和分析ncbi上注释的假单胞菌基因组，确定待克隆目的基因的序列并合成相关引物，构建重组质粒。

2.构建重组大肠杆菌bl21（petduet-trey-trez）：将重组质粒导入大肠杆菌表达宿主bl21中，构建重组大肠杆菌并进行诱导表达。

3.确定重组酶酶活及重组蛋白表达量、并进行全细胞催化实验测定海藻糖生成量：根据文献中现有方法对重组酶进行酶活测定以及蛋白浓度的测定；最后将重组菌进行全细胞催化，确认该重组菌是否具有合成海藻糖的功能。

4. 研究创新点

本论文将假单胞菌A1501中另外推测的用于海藻糖合成的两种途径的基因在大肠杆菌中克隆表达并验证它们的功能，从而进一步完善假单胞菌的海藻糖代谢机制。