金针菇漆酶基因的克隆和序列分析开题报告

1. 研究目的与意义

木质素(lignin) 是一种高度复杂、不定形的芳香族化合物，是仅次于纤维素的第二大再生有机资源。木质素的降解非常困难，大多数生物不能直接利用，因而造成这一自然资源的巨大浪费。白腐真菌木质素降解酶系白腐真菌pa ina cation of cdna ends, nhanced production of laccase in trametes vesicolor by the addition of ethanol.bioteungus dichom在木素的降解方面发挥着重要作用，漆酶的研究更是近年来研究的热点。

国内关于漆酶的研究虽然也日益增多，但很多研究仅仅局限于产酶条件、产酶能力、酶学特性等基础性研究，金针菇具有很强的木质素分解能力，对其漆酶的基因克隆、异源表达以及酶学特性等方面总体上相关研究较少。

本文通过pcr技术，基于漆酶高度保守性序列设计简并性引物，克隆新的漆酶基因并分析其基因序列特征，并电转化入巴斯德毕赤酵母中进行异源表达，为将来的高效表达及工业化应用提供理论依据。

2. 国内外研究现状分析

国内外近期对于金针菇漆酶的开发利用不是很多。漆酶在真菌色素合成中扮演重要的角色，并可能参与菌索的形成，它也能在细胞间催化酚类化合物的聚合粘连来固定菌丝。人们已经利用漆酶的这种粘合功能进行化工行业的开发研究。

用漆酶选择性降解木质素生产纸浆，可消除高温蒸煮对纤维素的破坏，使生产在温和条件下进行，节约设备和成本。可提高漂白质量，并且漆酶和一些介体（通常是abts）协同作用效果更佳。

漆酶加剧五氯苯酚（pcp）等酚类物质及其衍生物的降解[31]，可令多环芳烃几乎完全矿化，还可用于高度稳定的多种染料的脱色。elithbeth的试验表明，只有漆酶活力和染料的脱色效果呈正相关，说明漆酶在其中起重要作用。另外漆酶可使氯代农药彻底分解。

3. 研究的基本内容与计划

金针菇中的漆酶的dna序列表达以及关于培养金针菇菌丝的适宜条件。然后对此设计出相对应微点的引物，培养出相适应的dna片段，对其进行克隆。

开始阶段培养基的设计，dna、rna的提取，转酵母的培养，最后酶活测定。

后期通过对提取到的dna片段的pcr等操作，最后将目的基因片段与现有金针菇漆酶dna序列进行比对，确定其是否为新的金针菇漆酶基因，是否对今后漆酶的研究和发展提供帮助。

4. 研究创新点

DNA引物的重新设定，根据不同的分段对DNA链进行新的剪切,从中得到DNA片段，在比对之后确定是否是新型的漆酶基因，并以此为基础讨论对以后的发展。

在培养金针菇的时候进行培养基的优化设计，在多个平行样中找出最优方案。