血红蛋白提高重组酵母产β-葡萄糖苷酶的研究开题报告

1. 研究目的与意义

目的：构建XynB-VHb-GS115，提高毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶

意义：以期利用β-葡萄糖苷酶改善纤维素炼化阶段的困境。

2. 国内外研究现状分析

透明颤菌血红蛋白(Vitreoscillahemoglobin,VHb)是一种类似于人血红蛋白的胞内可溶物质,它能够从分子水平上提高VHb工程菌对氧气的利用能力,从而提高生物量积累,提高重组蛋白产量并且提高氧气的利用率,基于此种特性,到目前为止,VHb已经在不同的宿舍菌内共表达实现了α-淀粉酶、青霉素酰化酶及PHB等多种生化产品发酵生产成功应用。其中,巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是目前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一。它不但克服了大肠杆菌表达系统不能表达结构复杂的蛋白质、表达的蛋白多形成不溶性包涵体、背景蛋白多、表达量一般不是很高等缺陷;弥补了哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统操作复杂,表达水平低,产业化生产造价昂贵的不足,还具有其他酵母表达系统无法比拟的优越之处,但是酵母为高耗氧微生物,在高密度发酵过程中常常会出现供氧不足而限制了细胞密度的情况。

3. 研究的基本内容与计划

⑴表达质粒vgbh-ppic9kn转化及重组子的筛选

⑵以原始的bgl1-gs115为对照,通过控制供氧量,对已实现共表达的xynb-vhb-gs115基因工程菌在发酵罐水平的培养,来衡量vhb蛋白对酶蛋白产量的影响

2012.2中旬阅读指定文献，对实验方法及内容进行了解并撰写文献综述。

4. 研究创新点

构建高产β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母基因工程菌拟通过在毕赤酵母中共表达VHb蛋白来改善基因工程菌对氧气的利用效率来提高酶蛋白的分泌量从而提高活力。