木聚糖酶xynB基因与漆酶lacA基因的融合表达开题报告

 2021-08-09 00:04:31

1. 研究目的与意义

目的:成功构建木聚糖酶与漆酶的融合酶基因,并在毕赤酵母GS115中成功表达。

意义:白腐真菌及其发酵的酶能有效用于造纸木质素、含酚工业废水、纺织染料废水的处理及其环境中多环芳香碳水化合物及杀虫剂、农药的降解。特别是白腐真菌降解酶系中的漆酶,它具有较广的专一性,能够催化多酚、木质素、氨基苯酚、多胺、芳基二胺和特定的无机离子的氧化反应,而且形成的自由基可以继续引发高聚物的解聚、重聚、脫甲基和苯醌类的生成等,比过氧化物具有更大的优势和应用潜力。然而,漆酶基因在毕赤酵母中的表达产量一直不太理想,通过融合酶的表达来提高漆酶产量并表达双功能酶,并应用于纸浆漂白的工业中。

2. 国内外研究现状分析

国内外对融合酶的应用研究包括:融合酶在木质纤维素等生物质多糖降解上的应用、手性催化-辅酶再生偶联体系中的应用、代谢途径调控中的应用等。

目前主要研究障碍是对融合酶各个结构域之间的相互影响及其分子机理还缺乏足够的认识,同时,对于融合策略的选择尚没有可靠的理论指导。

因此融合酶今后的发展方向在于两方面:一方面,可以利用分子动力学模拟对融合酶进行分子设计和机理解析;另一方面,通过对连接肽进行改造 ,有望能实现对融合酶结构域之间空间组织关系的精细调控。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容: 1. 表达载体ppiczαc-xynb-laca的构建;

2. ppiczαc-xynb-laca在gs115中的表达与筛选;

3. 融合基因xynb-laca表达条件的优化。

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4. 研究创新点

1. 通过木聚糖酶与漆酶的融合表达提高漆酶基因的表达水平;

2. 通过木聚糖酶与漆酶的融合表达提高漆酶稳定性,扩大漆酶的应用范围;
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