1. 研究目的与意义
苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4.3.1.5)可以催化L-苯丙氨酸生成反式肉桂酸,是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶,也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。来自单子叶植物的苯丙氨酸解氨酶同时具有苯丙氨酸解氨酶活性和酪氨酸解氨酶(TAL)活性,但TAL相对PAL活性较低。本课题旨在于对来源于玉米的苯丙氨酸解氨酶进行理性设计及对其改造后,期望使得玉米苯丙氨酸解氨酶的底物特异性发生改变,使其酪氨酸解氨酶活性有所提升。
2. 国内外研究现状分析
详见文献综述
3. 研究的基本内容与计划
(1)突变引物设计以及目的基因获得;(2)目的基因的克隆表达;
(3)突变体的获得;
(4)有益突变体的确定。
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4. 研究创新点
通过定点突变对PAL进行选择性遗传修饰,有可能在PAL高活性水平特别是高稳定性育种中获得突破。而高水平高稳定性PAL的获得,将进一步推动PAL本身的研究。通过生物法制备香豆酸,减少通过化学法等手段制备香豆酸而带来的环境污染等问题,而且降低了规模化生产的成本。
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