1. 研究目的与意义
海藻糖是一种非常重要的非还原性二糖,广泛的存在于生物体内[1-3]。海藻糖通过外加式能对生物体和生物大分子起到良好的非特异性保护[4]。对于生物体的能源储备,细胞保护,代谢调控及细胞组成等方面起着重要的作用。因此,在农业,医疗,食品加工和化妆品等领域海藻糖都具有重要的应用价值。
利用海藻合酶将麦芽糖转化为海藻糖只需要一步反应,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。鉴于本实验室已构建好工程菌BL21(DE3)-pETDuet-TreS所产酶的酶虽酶活尚可,但热稳定性能较差,离实现工业生产尚有一定差距。为使其满足工业生产的要求,有必要建立一种有效的定向进化方法对其进行改造。
在几种常见的定向进化方法中,易错PCR能够随机的在该基因中引入点突变。易错PCR产生的突变体中具有海藻糖酶活性的突变体所占的比例较高,正向突变率高,适合筛菌策略。若能找到改善热稳定性得到一定程度改善的海藻糖酶,则能上推动海藻糖的工业制备,最终造福于人类。2. 国内外研究现状分析
见文献综述
3. 研究的基本内容与计划
通过易错pcr改善酶热稳定性
2014.2.25-2014.3.10:查阅文献,拟定实验方案,写开题报告,并进行英文翻译,准备实验仪器与实验试剂、材料;
2014.3.11-2014.5.25:进行课题的实验部分,进行表征与测试;
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4. 研究创新点
本实验室特有的突变进行筛选
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