椎体虫中Skp1蛋白的质粒构建开题报告

1. 研究目的与意义

椎体虫（trypanosome）是动鞭毛虫纲(zoomastigophorea)动质虫目(kinetoplastida)锥体虫属(trypanosoma)的通称。成虫主要寄生在脊椎动物(尤其是鱼类、鸟类和哺乳类 )的血液中。多数种类需要一个中间宿主(昆虫或蛭)方能完成其生活史。

s期激酶相关蛋白1（skp1）是真核生物中普通存在的一类蛋白。

本实验将利用蛋白质重组技术将椎形虫skp1基因插入到氨苄青霉素抗性的质粒中，然后对蛋白质进行体外表达并纯化的过程，通过实验对质粒构建，蛋白检测及纯化进一步了解。

2. 研究内容和预期目标

本试验主要利用蛋白质重组技术将椎体虫Skp1基因插入到氨苄青霉素抗性的质粒中，然后对蛋白质进行体外表达并纯化的过程，因此本试验的内容主要包括一下几个方面：

1. 目标基因的扩增，酶切
2. 目标基因插入到载体中
3. 目标基因的表达
4. 目标蛋白的纯化

3. 研究的方法与步骤

研究方法：

运用pcr扩增目的基因，目的基因和质粒经过酶切后，进行酶切片段连接，完成质粒构建，把质粒转入感受态细胞完成转化，采用sds-page检测蛋白质的表达，最后目的蛋白纯化。

实验步骤：

4. 参考文献

Kazi Rahman1,2, Peng Zhao. The E3-Ubiquitin Ligase Adaptor Protein Skp1 is Glycosylated by an Evolutionarily Conserved Pathway that Regulates Protist Growth and Development. JBC Papers in Press. Published on December 30, 2015

5. 计划与进度安排

1. 3月2号-3月30号 目标基因的扩增，酶切，插入及检验
2. 4月1号-4月15号 目标基因的蛋白表达及检验
3. 4月16号-4月30号 目标蛋白的纯化
4. 5月1号-6月1日 数据整理及毕业论文的撰写