几种金属对产辅酶Q10类球红细菌发酵影响开题报告

1. 研究目的与意义

辅酶 q₁₀（coenzyme q₁₀，coq₁₀）又叫做癸烯醌、泛醌（ubiquinone），化学名称为2，3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基-1，4-苯醌。是一种重要的生化药剂，目前辅酶q₁₀已被广泛的应用于医学领域。辅酶q₁₀在临床医学中的应用主要包括以下几个方面：

（1）用于坏死性牙周炎的治疗，也可用于口腔卫生制品，可预防牙病和牙龈炎。对胰腺功能作用也较显著。

（2）用于心血管疾病方面，比如风湿性心脏病、缺血性心脏病、缩窄性心包炎等

2. 研究内容和预期目标

主要研究内容：

本研究立足于国内外研究现状，在现代微生物育种技术、生物生化技术等多学科基础上，对类球红细菌进行培养基优化，通过单因素实验考察实验室中较为常见的几种金属离子对类球红细菌产辅酶q10量的影响，通过pb及响应面分析法对这些筛选出来的关键离子进行寻优，具体研究内容如下：

1）活化保存的菌种，熟悉相关操作。

3. 研究的方法与步骤

（1）发酵液中菌体中的辅酶q10的提取步骤

取辅酶q₁₀发酵液1ml于干燥洁净的10ml离心管中，再加入200ul的0.01mol/l的盐酸混匀之后在90℃的水浴锅里水浴15min，取离心管于电子天平上配平，根据配平后的对应关系放入高速冷冻离心机中，设定转速为5000r/min，时间15min，温度4℃进行离心。离心结束后，取出10ml离心管，将经过高速冷冻离心后得到的上清液体倒掉，然后将剩余的固体沉淀加5:3的有机溶剂（50%的乙酸乙酯和30%的乙醇混合溶液）将辅酶q10溶解于其中，充分混匀后将离心管置入超声波中超声30min溶解溶液中的细小杂质为了之后液体进入液相色谱仪中进行分析。30min之后将离心管静置15min，在这十五分钟期间隔5min摇晃一次，之后放在天平上进行配平，然后根据配平关系放入高速冷冻离心机里进行离心，条件是4℃,15min。离心之后取出离心管，将上清液用10ml的注射器通过滤头进行过滤，过滤后的上清液取60μl上样，进行液相分析。之后根据液相色谱仪上显示的对应的峰面积大小确定菌体中产的辅酶q10。

（2） 菌体干重的制备

4. 参考文献

1 李祖明, 林宇翔, 秦菲,等. 类球红细菌3757发酵生产辅酶q_(10)的工艺优化[j]. 中国食品学报, 2014,14(7):124-129.

2 hal a, joelm, elke n, et al. engineering yeast transcription machinery for improved ethanoltolerance and production.[j]. science, 2006, 314(5805):1565-1568.

3王春林，中国大豆辅酶q₁₀ 的提取，分离和鉴定[j]，中国药工业杂志，1996,27（3）；101-105.

5. 计划与进度安排

1）2022-10-12～2022-10-20：查阅资料撰写开题报告；

2）2022-10-21～2022-11-14：斜面培养基制备与菌种的活化,熟悉相关操作；

3）2022-11-15～2022-01-10：参考文献，设计pb实验筛选出影响最大的三个金属离子；