人类VASH2去氨基端蛋白的体外构建研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究的背景：vasohibin是在vegf诱导人脐静脉血管内皮细胞(huvecs)基因表达谱的dna微阵列实验中所发现。近年，有关学者又发现了与vasonhibin同源的基因，命名为vasonhibin-2。vasonhibin-2可以抑制血管的形成，也是迄今发现为数不多的以负反馈方式调节血管生成的抑制因子，为血管生成负反馈调节研究开启了新篇章。vasonhibin在多种血管生成异常相关的疾病的发生和发展中可能发挥重要作用，可以对相关的疾病治疗等提供了依据。因此，我选择人类vash2去氨基端蛋白体外的构建研究课题，探究vasonhibin-2在人体内血管生成中扮演的角色。

目的：研究vasonhibin-2与其他蛋白的相互作用机理以及该蛋白结构和功能作用。

意义：为后续功能性研究或蛋白相互作用研究提供物质基础，更加了解vasonhibin-2（血管抑制蛋白）。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：本实验主要研究一种血管抑制蛋白（vash2），该蛋白能与小分子血管抑制结合蛋白（SVBP）相结合，这两个蛋白相互作用后具有微管去酪氨酸活性。进而调节微管的组装与去组装。

预期目标：通过体外构建该蛋白的重组蛋白，让该蛋白在大肠杆菌中成功表达，得到一些有关信息。

3. 研究的方法与步骤

研究方法：为保证研究的科学性、规范性与实用性，本课题收集了大量的文献资料和实验（体外构建该蛋白的重组蛋白，在大肠杆菌内进行表达）。

步骤：一、查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；二、选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；三、目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等四、整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图

五、提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文

4. 参考文献

1.王芳，白怀；血管生成抑制蛋白vasohibin的研究进展，2011，《基础医学与临床》

2.程诚，郑瑞锋和王彦威；vash vash1 1和 和vash vash2 2表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响 表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响，2019，《癌症进展》，23期

3.葛倩倩，涂敏，高文涛等；核型vash2促进人胚胎组织细胞的增殖研究，《南京医科大学学报》，2015年5月

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周，查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；（2）第3周~第6周（2022-3-9~4-3），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-6~5-8），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等（4）第12周~第14周（2022-5-11~5-29），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-1~6-10），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文