抑制剂对球头三型孢菌影响机制开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：赤藓糖醇是一种天然、零热量、可替代蔗糖的填充型甜味剂， 不引起血糖升高， 不致胖， 防龋齿。天然是指其为生物发酵糖醇; 零热量是指口感清凉， 发热量低， 仅为蔗糖发热量的 1 /10， 甜蜜无负担。赤藓糖醇是低糖低热量天然食品研发的首选配料。 据日本专利报道，球头三型孢菌可以耐受20%-60%的葡萄糖，通过磷酸戊糖途径生产赤藓糖醇。

研究目的：由于球头三型孢菌在通过磷酸戊糖途径生产赤藓糖醇的同时，会经历糖酵解途径产生副产物甘油，既降低了赤藓糖醇得率，又为后期的产物分离增加难度。所以，通过抑制细胞中影响甘油生产的酶-hog1蛋白激酶的活性，试图降低甘油的产生，提高赤藓糖醇得率。

研究意义：通过降低发酵过程中甘油的产量，提高葡萄糖利用率，降低生产成本。

2. 研究内容和预期目标

主要研究内容：

研究hog1 mapk的三种抑制剂—sb203580、sb201290以及sb239063对球头三型孢菌代谢及对hog1活性的影响、

预期目标：通过添加hog1抑制剂，降低葡萄糖到甘油的流量，增加赤藓糖醇产量。

3. 研究的方法与步骤

研究方法：多元醇产量测定测定采用hplc；菌重测定采用细胞干重法；葡萄糖消耗测定采用sba生物传感仪法；hog1活性检测采用western blot方法。

步骤：将从发酵罐中取出的样品离心，取上清，稀释适当浓度后，用0.22微米的滤膜过滤，用液相测定多元醇产量。同时将上清液稀释合适倍数后，用sba生物传感仪测定残余葡萄糖含量。离心得到的菌体重新清洗两次后，放烘箱烘至恒重。

将细胞破碎裂解后得到的蛋白，跑sds-page蛋白胶，转膜，封闭，孵一抗，二抗，显色。

4. 参考文献

[1]贾伟，周志江，韩烨，刘媛媛。丛梗孢酵母发酵产赤藓糖醇条件的优化，食品工业科技，2012，33（13）：170-173。

[2] diano a, bekker-jensen s, dynesen j, nielsen j. polyol synthesis in aspergillus niger: influence of oxygen availability, carbon and nitrogen sources on the metabolism,biotechnol bioeng., 2006, 94(5):899-908.

[3] 李良智，尤吉，王伟，扶教龙。核糖醇发酵工艺研究，生物技术，2011，21(1)：88-91。

5. 计划与进度安排

2022年12月1日-2022年12月31日

课题文献阅读，调研，初步确定研究方案。

2022年2月15日-2022年3月15日