切割液配比对多肽从树脂剥离效果的影响分析开题报告

1. 研究目的与意义

多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成,它也是蛋白质水解的中间产物^[1]。一般来讲氨基酸数量在100以内称为多肽。蛋白质的结构片段多肽来说,多肽也是蛋白质发挥作用的活性基团,是人体进行代谢、调控活动的重要物质。

多肽的合成是多肽合成是一个固相合成顺序一般从c端（羧基端）向 n端（氨基端）合成。多肽的合成包括化学合成和生物合成。一般对于固体相来说对多肽有boc固相合成切割以及对fmoc固相合成切割。切割液一般包括三氟乙酸在氨基酸和多肽化合物合成方面有着非常重要的应用,用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基，其英文名为：trifluoroacetic acid。缩写：tfa，分子式为：cf3cooh，分子量为114.02^[2]。1,2乙二硫醇，其英文名为：ethylene mercaptan。缩写：edt，分子式为：c2h6s2，分子量为94.19^[2]。三异丙基硅，其英文名为：triisopropylsilane。缩写：tis，分子式为：c9h22si，分子量为158.36^[2]。还有纯水等。固相多肽合成完成之后，必须选择合适的切割试剂将多肽从树脂上切割下来，然后经过冰乙醚沉淀，离心收集沉淀，经过hplc分离纯化，冷冻干燥得到最后产品^[4]。对于一般公司来说采取针对fmoc固相合成切割。随着合成技术的发展，切割技术也有了大的进步。

本课题通过根据不同氨基酸配制出不同比例或不同浓度下的切割液。在保证时间，温度等条件相同的条件下，改变采反应切割时间，切割液不同配比等方面利用并合理配比切割液保证切多肽从树脂上剥离出最好的效果，最大限度的保证多肽的质量，为企业工业生产提供生产工艺技术支持。通过不同的配比，改变切割条件更好的让多肽从树脂上剥离下来有利于粗产品的下一步纯化加强了产品的质量。有利于企业提高效益。

2. 课题关键问题和重难点

本课题是切割液配比对多肽从树脂剥离效果的影响。要根据不同的环境，温度，切割液的浓度不同去对比所多肽从树脂剥离效果。切割及去保护是合成中最重要步骤。如果试剂和反应条件选择不当，产物会发生不可逆的修饰而被破坏，因此在切割时应注意以下几个问题：1、选择合适的切割及脱保护试剂，根据合成肽氨基酸的不同而选择；2、选择合适的试剂浓度、反应时间、温度等条件；3、氨基酸侧链的保护，在切割时，切割试剂或切割产物可能对一些对其敏感氨基酸侧链造成破坏或修饰，因此，反应时要选择合适试剂和条件，必要时，对敏感侧链进行保护，使其遭到最小程度的破坏。切割后采取的纯化采取高效液相色谱。

另外，本研究课题还使用了离心机、调速振荡器等试验仪器。

3. 国内外研究现状（文献综述）

1多肽的简介及切割液的介绍

1.1多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成,它也是蛋白质水解的中间产物。一般来讲氨基酸数量在100以内称为多肽。蛋白质的结构片段多肽来说,多肽也是蛋白质发挥作用的活性基团,是人体进行代谢、调控活动的重要物质。

1.2切割液一般包括三氟乙酸在氨基酸和多肽化合物合成方面有着非常重要的应用,用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基，其英文名为：trifluoroacetic acid。缩写：tfa，分子式为：cf3cooh，分子量为114.02[2]。1,2乙二硫醇，其英文名为：ethylene mercaptan。缩写：edt，分子式为：c2h6s2，分子量为94.19[2]。三异丙基硅，其英文名为：triisopropylsilane。缩写：tis，分子式为：c9h22si，分子量为158.36[2]。还有纯水等。

4. 研究方案

本课题的切割方法是针对一般固相合成的树脂切割，对于较长链的多肽上的树脂进行切割的对比实验分析。

1 在保证是同条肽，在相同的质量下，配出不同的切割液，第一次保证切割时间相同，温度，倒入切割液的量相同，改变切割液的配比可以采用不同切割液的配比，可以采用92.5切割液，95切割液，88切割液等。

2 在保证是同条肽，在相同的质量下，配出不同的切割液，第二次次保证切割液的配比，温度，倒入切割液的量相同，改变切割的切割时间，切割时间可以为1.5h，2h，2.5h等。

5. 工作计划

第1～2周： 查阅、收集相关文献资料，设计实验方案，撰写开题报告 。

第3周： 撰写开题报告ppt准备演讲，外文文献翻译，做基本实验。

第4～8周： 做实验，记录数据，处理讨论数据结果，准备期中小结。