DH2小鼠单克隆抗体的制备开题报告

1. 研究目的与意义

免疫逃逸是肿瘤发生过程中的重要标志和主要机制。

肿瘤的免疫疗法 是通过增强机体对癌细胞的识别能力，利用机体自身的免疫能力对肿瘤进行清除。

与手术、化疗、放疗等传统疗法相比，肿瘤免疫疗法具有肿瘤靶向性好、疗效持久，临床副作用小等优点。

2. 课题关键问题和重难点

1.抗原的制备：查找数据库，找出准备用来进行免疫的抗原，构建质粒载体进行表达纯化，并对抗原性质进行鉴定，确保抗原符合所需。

2.小鼠免疫：确定小鼠免疫的方案，对小鼠进行3-5次免疫，使血清的抗体滴度尽可能提高，以降低获得高亲和力抗体的难度。

3.细胞融合及杂交瘤细胞筛选：根据所需抗体的性质，使用elisa，facs，wb等试验手段对融合后的杂交瘤细胞进行筛选并做亚克隆，以期获得表达高亲和力抗体的单克隆细胞。

3. 国内外研究现状（文献综述）

免疫检查点疗法综述摘要：免疫检查点疗法原理是通过靶向t细胞信号调节通路来增强其抗肿瘤的免疫应答作用。

此疗法已经在临床上获得了很好的效果，为肿瘤的治疗提供了新的武器。

本文对目前几种比较热门的免疫检查点及其疗法进行了综述。

4. 研究方案

1.抗原制备：从分子组得到抗原质粒载体，进行293F瞬时表达，使用AKTA纯化仪进行抗原纯化2.抗原鉴定：蛋白电泳检测纯度，NanoDrop检测浓度，WB检测性质3.小鼠免疫：对小鼠进行3-5次免疫（50-100ug/只/次），期间Elisa检测血清中抗体的含量4.细胞融合：利用PEG是SP2/0细胞和小鼠脾脏淋巴细胞进行融合，获得表达抗体并能无限增殖的杂交瘤细胞。

5.利用Elisa，FACS及有限稀释法筛选获得表达高亲和抗体的单克隆细胞6.培养单克隆细胞，表达抗体并纯化7.利用Elisa，FACS，Biacore对抗体进行鉴定，筛选获得满足后续研究的抗体

5. 工作计划

1.抗原制备：从分子组得到抗原质粒载体，进行293f瞬时表达，使用akta纯化仪进行抗原纯化，预计2周2.抗原鉴定：蛋白电泳检测纯度，nanodrop检测浓度，wb检测性质，预计3天3.小鼠免疫：对小鼠进行3-5次免疫（50-100ug/只/次），期间elisa检测血清中抗体的含量，预计9-15周4.细胞融合：利用peg是sp2/0细胞和小鼠脾脏淋巴细胞进行融合，获得表达抗体并能无限增殖的杂交瘤细胞。

预计2周5.利用elisa，facs及有限稀释法筛选获得表达高亲和抗体的单克隆细胞，预计6-8周。

6.培养单克隆细胞，表达抗体并纯化，预计2周7.利用elisa，facs，biacore对抗体进行鉴定，筛选获得满足后续研究的抗体，预计1周。