多肽BC-13(Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg)的纯化开题报告

1. 研究目的与意义

1、选题背景

穿膜肽是一些具有细胞膜穿透能力的小分子多肤，可有效携带比其分子质量大100倍的外源性疏水大分子进入细胞．并对宿主细胞没有显著毒副作用。穿膜肽存在多种穿膜机制，诸如直接渗透到细胞膜，通过易位形成的一个暂时性的结构和内吞作用介导入膜等。具体的穿膜机制还不清楚，但普遍认为穿膜肤与细胞表面负电荷物质的直接接触是必不可少的。由于穿膜肽的穿膜性质，其在分子生物学、药学、细胞生物学、疫苗学甚至影像学上有广泛的应用前景。

2、意义

2. 课题关键问题和重难点

1、bc-13的溶解性：

bc-13的序列：tyr-gly-arg-lys-lys-arg-arg-gln-arg-arg-arg

酪氨酸tyry

3. 国内外研究现状（文献综述）

hplc的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的hplc应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是hplc能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。

开机：开灯，将乙腈浓度从95%调至5%，采集基线，冲柱子，平衡10分钟左右。溶解粗品，加入2滴管纯水，2滴管乙腈，搅拌，在超声机里加速溶解。直至全部溶解，用针管吸取溶解后的粗品，把针头换成滤头，过滤到收集瓶中，如果滤不出来，放入离心机离心，取上清液过滤，贴上标签。分析粗品：用注射器吸取20μl进样，进行粗品分析。分析出主峰，一般最高峰为主峰。以粗品分析色谱图为标准，调节梯度（出峰时间*3=乙腈浓度）进行产品制备。产品制备：用注射器吸取4ml粗品进样，收集产品，没出一个峰收集一次，每个峰都用收集瓶接取1/3处，将目标峰收集出的产品取一前一后各1μl放入离心管，送去进行质谱分析。结果正确的话，进行产品分析。若质谱结果不对的话，取其它峰进行质谱分析，若都不对，取粗品进行质谱分析。产品分析：注射器吸取一前一后共20μl进样，进行产品分析。看谱图，若是产品纯度高，则说明产品峰前后都是平衡，没有杂峰。若峰前或峰后有小拐，则说明前一瓶或后一瓶有杂质，应舍去。若是产品峰周围有杂峰，说明产品纯度不够。将纯度达标的产品贴上标签，放到冻干机上冻干，送去称量。

多肽的种类很多且大多具有相似性，使用单一的分离纯化手段已经不能达到理想的分离纯化效果。hplc有可以进行大规模制备等优点，但存在费时、价高等缺点，因此高效液相色谱与其他分离纯化方法联用技术在多肽分离纯化中已显示出巨大的优越性。集成超滤、离子交换色谱、逆流色谱及凝胶色谱等多种分离技术对草鱼蛋白肽进行逐级纯化。运用超滤法从脱卵磷脂卵黄酶解物中分离多肽，又利用高效液相色谱法进一步分离纯化了两种不同的具有很强抗氧化活性的多肽并用毛细管电泳对分离的多肽进行鉴定，结果显示很高的纯度。此外，利用连续色谱和串联电喷雾质谱成功的对金枪鱼骨架蛋白酶解物中抗氧化肽进行了分离纯化，并对其进行了研究，结果表明，金枪鱼骨架蛋白的抗氧化活性肽在亚油酸体系中表现出很高的抗氧化性。高效液相色谱与其他分离纯化方法的联用技术，集中了各种方法的优势，弥补了各技术的不足，在多肽及其他大分子分离纯化的研究上，越来越受到国内外科研工作者的重视。

4. 研究方案

1、色谱柱的选择：主要依据被测物质的分子量、溶解度、离子化性能。根据结构分析，相同的氨基酸组成使它们具有相同的分子量，而不同的氨基酸序列导致了共同特点和亲、疏水性差异，依据这种差异，可以采用高效液相色谱去实现分离。

2、流速：依据色谱柱的大小决定，色谱柱越大，流速越大。我们实验室使用c18色谱柱，流速为20ml/min。

3、乙腈浓度（梯度）调节：梯度越缓，峰分的越缓慢，分的越开。

5. 工作计划

多肽bc-13：序列：tyr-gly-arg-lys-lys-arg-arg-gln-arg-arg-arg

第一周：熟悉实验室环境、安全规范，了解项目的背景，根据选题进行材料收集,同时进行相关文献的检索，确定试验方案以及研究方向。

第二周：熟悉实验室反应设备的装置，反应的监测、反应液的后处理和产品的纯化，原料及产品的分析方法，撰写开题报告。