植物内生细菌根部定殖对小麦生理生化的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义许多国家都存在土壤有机污染问题。

在我国，有机污染土壤面积十分庞大，仅农药污染土壤面积就达 1.4 亿亩；多环芳烃（pahs）已成为土壤环境中常见的一类重要污染物[1-3]，其疏水性强、难于降解、易在土壤中累积，严重危害农产品安全和人群健康。

土壤有机污染已成为当前限制我国农产品国际贸易和经济可持续发展的重要障碍之一[4,5]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标选取芘降解功能内生细菌：粘质沙雷氏菌株，弄清其在植物体内的定殖性能。

系统地阐明功能内生细菌根部定殖对植物生物量影响及吸收积累pahs 的调控规律，探明其对植物代谢 pahs 的影响， 明确植物内生细菌根部定殖对植物邻苯二酚2，3双加氧酶的活性的影响。

研究内容 （1）具有pahs 降解特性的植物内生细菌的根部定殖 以抗利福平为标记，用浸根方法接种上述筛选出的内生细菌，检测其在植物根、茎组织上的定殖情况。

3. 研究的方法与方案

研究方法/实验方案（1）小麦水培试验 利用降解菌株pw7进行定殖研究，对其进行抗性标记，再将培养24 h的抗性菌株配成菌悬液，采用适合于植物修复的浸根方法接种，采集植物样品的根、茎叶、培养液，消毒捣碎涂布，进行菌落计数，以及菌落形态和芘降解特性测定，以确定其为接种的菌株，即定殖成功。

降解菌株抗性标记：将分离筛选的降解芘植物内生细菌pw7进行抗性标记：将目标菌稀释成一定浓度，在lb抗性平板上点菌，30℃培养2 - 4天，待有菌落长出后，挑取单菌落移入浓度较高的抗性平板上，并获取抗性菌落，使抗生素的浓度由低到高逐渐增大，直至挑选最稳定的抗性菌株。

将抗性菌株在最高浓度（三种抗生素的终浓度均为100mgl1）的三抗平板上连续转代5次以上，稳定突变菌株pw7的抗性。

4. 研究创新点

特色或创新之处本项目在实验室前期研究工作的基础上，选取芘降解功能内生细菌：粘质沙雷氏菌株，弄清其在植物体内的定殖性能，有望丰富 PAHs功能菌库，并可为其它有机污染物的植物功能内生细菌的筛选提供参考。

尝试探索根部定殖的功能内生细菌对植物生物量的影响及吸收积累 PAHs 的调控作用，探讨植物体内主要酶系活性对功能内生细菌根部定殖的响应及其与植物代谢 PAHs 的关系，有望系统地阐明内生细菌调控植物吸收 PAHs 的作用规律及机理，研究结果可为利用植物体内的内生细菌来有效规避作物有机污染风险提供重要思路和途径。

5. 研究计划与进展

研究计划2015年3月实验前期准备，降解菌株抗性标记，芘污染霍格兰营养液配置，进行小麦水培试验。

2015年4月植物样品采集与处理，植物体内芘的提取与测定，培养液中芘含量的测定，邻苯二酚2，3双加氧酶活性测定。

2015年5月-6月整理分析数据，总结定殖对植物内多环芳烃及植物生理生化影响，撰写毕业论文预期进展通过分析植物内生细菌根部定殖方式下植物生物量、培养液和植物体内pahs含量、植物体内邻苯二酚2，3双加氧酶的活性，弄清植物内生细菌根部定殖对植物生理生化的影响。