耐铜细菌的分离鉴定、生理特性和对土壤铜的钝化研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

铜是生物正常生长发育所必需的微量元素，但过量的铜会干扰动植物和人的正常生理功能，造成植物生长缓慢甚至死亡且通过食物链危害人类健康，导致环境恶化，且随着工农业的发展有进一步的扩大趋势，由此可见铜污染问题危害极大，铜污染修复具有重要的现实意义[1]。

重金属污染土壤修复的研究目前已成为农业、生态和环境领域研究的重要内容，可采用物理、化学和生物修复等方法进行修复[2、3]，主要可通过两种作用影响土壤重金属：一是固化作用，使重金属在土壤中由活化态转变为稳定态，从而减少重金属的迁移性和生物可利用性；二是活化作用，将重金属从土壤中去除，使其残留浓度接近或达到背景值。

其中后者是永久性方法。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标通过对筛选出来的细菌进行纯化培养和研究，鉴定铜矿附近土壤中耐铜细菌的种属，探讨细菌在不同生长环境下对铜的耐性能力，研究该种细菌对铜污染土壤的耐性修复机制。

2、研究内容从马鞍山铜矿附近土壤中筛选出对铜耐性较强的细菌，纯化培养并用16srna 序列分析法鉴定细菌种属。

研究： 1耐铜细菌的生理生化特性，通过对细菌进行过氧化氢酶试验、氧化酶试验、淀粉水解试验、明胶水解试验、甲基红mr试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、乙酰甲基醇v-p试验和糖发酵试验等试验，了解耐铜细菌的生理生化特性。

3. 研究的方法与方案

1研究方法、实验方案及可行性分析1.1细菌筛选的过程，包括如下步骤 ：a. 抗重金属菌株的富集：取1g铜污染土壤添加到9ml无菌水中悬浮，培养条件 30℃ 180r/min，培养24h。

b. 抗重金属菌株的筛选：配置基础培养基：lb 固体培养基，添加硫酸铜溶液到100mg/l，灭菌。

取200ul细菌培养液涂布接种于固体平板上。

4. 研究创新点

1、选择从马鞍山铜矿附近的土壤中筛选出来的细菌对铜进行耐性研究，将该细菌加入当地土壤中修复铜污染可以很好的适应当地的土壤、气候等外在条件，较其他地方引来的微生物条件更好。

2、目前，用于土壤修复研究的微生物的研究以具重金属抗性的细菌和真菌为主。

但菌根真菌对宿主植物有一定的选择性，并非所有植物都能形成菌根，且丛枝菌根真菌难分离纯化及纯培养，目前主要依靠盆鉢培养法获得孢子、菌丝和被侵染根段的混合物，且培育周期长，一定程度上限制了其应用价值。

5. 研究计划与进展

2016.11-2017.1 从马鞍山铜矿附近土壤中筛选出对铜耐性较强的细菌，纯化培养并用16srna 序列分析法鉴定细菌种属。

2017.1-2017.2（1）对细菌进行过氧化氢酶试验、氧化酶试验、淀粉水解试验、明胶水解试验、甲基红mr试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、乙酰甲基醇v-p试验和糖发酵试验等试验，掌握耐铜细菌的生理生化特性。

（2）通过不同ph值、营养盐、盐度对耐铜细菌进行培养，探讨耐铜细菌在不同环境因素的影响下的生长情况。