新型荧光蛋白在大肠杆菌中的表达及光谱特征开题报告

全文总字数：1885字

1. 研究目的与意义

研究的目的是构建新型荧光蛋白PEB-GAF，并在大肠杆菌中表达，检测其光谱特征。

其意义在于：为进一步利用这种新型荧光蛋白在生物细胞中的荧光标记奠定基础。

2. 国内外研究现状分析

荧光蛋白（fps）作为生物医学研究的基本工具，它的快速成长经常被认为是一种革新。第一次革新开始于二十年以前，当时原始的aequoreavictoria水母野生型绿色荧光蛋白(gfp)被优美的标记在线虫的感觉神经细胞中。自从那时，gfp持续的提供了新的不断完善的变种，有的更加明亮，有的覆盖了更加广的光谱范

围，也有的表现出更强的光稳定性，更少的的低聚性和ph不敏感性以及快速的成熟率。这种野生类型gfp经过分子进化可以产生各种各样的突变体，它们可以发射蓝光的bfp、青光的cfp和黄光的yfp等，但是具有橙色和红色荧光的fps一直很神秘。在1999年，一个来自非生物发光暗礁珊瑚的红色荧光蛋白(rfp)不期而遇的发现，这可以看做是fp的第二次革新。通过对这个rfp的不断改善和修饰，它成为一个明亮的、光稳定的、单节线性的、发射红光的衍生荧光蛋白。它的亮度几乎可以和最好的gfp突变体相媲美，这项研究到现在还在继续。目前，fps的研究是鼓舞人心的，虽然fps的荧光还没有覆盖到完整的可见光范围。

尽管fps在最近几年快速的发展，但是大多数人还是在用野生型的荧光加强型gfp，即egfp。同时，也发展了最初的cfp、yfp为荧光增强型的ecfp、eyfp。它们被用作大多数的荧光成像实验。许多研究者并不情愿使用新的突变体fps，这是因为开发者宣称的在亮度、光稳定性、单体特征和在融合中的应用有大的提高，但实际上并没有达到理想的效果。在需多的例子中，简单的寻找新型fps是一项耗时而且常常令人沮丧的挑战。除非建立一个有组织的，高效的系统去产生各种各样的突变型fps，否则在将来不太可能发生太大的改变。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：研究的主要内容就是利用分子生物学的方法构建含有色素合成酶编码基因和脱辅基蛋白编码基因的融合基因片段，并且把它插入到植物表达载体。

研究计划：

1、2015.12-2016.1：阅读与研究课题相关的文献；

4. 研究创新点

基于蓝细菌光敏色素的荧光蛋白具有潜在的应用价值，可以作为生物学荧光探针。本研究试图构建带有橙色荧光色素蛋白PEB-GAF的表达载体，使得这种蛋白能在细胞中表达，为进一步的研究奠定基础。