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1. 研究目的与意义
研究目的是测定Anabaena sp.PCC 7120藻蓝蛋白β亚基的自由基清除活性;研究意义是为进一步研究藻蓝蛋白抗氧化活性在食品、医药保健品等方面的研究奠定基础。
2. 国内外研究现状分析
Romay等率先报道从蓝藻Arthospira maxim中提取的C-PC具有抗氧化和抗炎作用。结果表明,C-PC能清除OH(IC50=76 g/mL)自由基,其活性等价于0.125 mg/mL的二甲基亚枫(DMSO)及0.038 g/mL的trolox。脱氧核糖测定结果与一些非甾体抗炎药的数据相同。C -PC还能抑制肝脏微粒脂过氧化物生成(ICSO=12 mg/mL)此后别藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性也相继被证实。Bhat等(2001)还发现藻蓝素(PCB)也有清除活性氧(亚硝酸过氧化物,ONOO)的活性,但活性低于藻蓝蛋白。Romay等在体外实验结果的基础上,采用12种动物造模方式进行了C-PC的体内抗炎症活性研究,结果发现C-PC在所有炎症造模鼠体内都有明显的消炎作用,呈现出一定的量效关系,且没有发现任何毒性反应(3000 mg/kg,口服);其中对大鼠耳炎症模型的研究中发现,藻蓝蛋白能够降低髓过氧化物酶(MPO)的活性,减轻组织水肿,并且无毒性;在大鼠结肠炎模型的研究中发现藻蓝蛋白不仅能够降低MPO的活性,通过组织病理和超微结构的观察发现,其还能够抑制炎症反应细胞的浸润及降低结肠的损伤,并且具有抗氧化和清除自由基的作用;在小鼠关节炎模型的研究中发现藻蓝蛋白能抑制花生四烯酸代谢,影响细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF)产生。在这些实验基础上,Romay等指出藻蓝蛋白的抗炎症活性部分来自于其清除自由基的能力。此外,Romay等还发现藻蓝蛋白能减少鼠肥大细胞释放组胺,从而抑制刺激性炎症反应。Rimbau等发现C-PC的抗氧化活性对红藻氨酸所致的大鼠脑神经损伤具有保护作用。C-PC还能对抗体外培养的钾和血清缺乏引起的大鼠小脑颗粒细胞死亡和对大鼠脑缺血再灌流后引起的神经元损伤具有保护作用。神经细胞保护机理研究表明,藻胆蛋白有抗凋亡活性,它可清除细胞受破坏后产生的自由基,避免自由基导致氧化性DNA损伤,而后者如不能及时修复,积累到一定程度,会启动凋亡程序,引起细胞凋亡。这些结果提示了藻胆蛋白开发为治疗活性氧导致的神经损伤疾病(如帕金森综合症)和缺血性脑血管病药物的良好前景。Fukino等报道螺旋藻及其藻蓝蛋白皆能对抗HgCl2引起的急性肝、肾中毒,藻蓝蛋白虽然不能缓解肾衰竭,但对肝脏有保护作用。Uadiraja等发现在用四氯化碳(0.6g/mg)或R-( )-长叶薄荷酮(R-( )-pulegone250mg/kg)处理大鼠前,对鼠灌胃C-PC (200mg/kg),能显著降低四氯化碳和R-( )-长叶薄荷酮对大鼠肝的毒害作用。进一步研究发现,藻胆蛋白的保肝作用主要是通过保护肝脏中的酶实现,而其作用机制也与藻胆蛋白的抗氧化活性有关,如清除四氯化碳诱导产生的H202。
3. 研究的基本内容与计划
研究内容是通过对羟基自由基和DPPH抗氧化活性的测定,评估藻蓝蛋白的抗氧化活性。1、2017.12-2018.1 :阅读与研究课题相关的文献; 2、2018.2-2018.4:完成与课题相关的实验,得出实验数据。主要是得出羟基自由基和DPPH自由基清除活性,评估藻蓝蛋白的抗氧化活性,为下一步的研究奠定基础;3、2018.5-2-18,6:对实验数据进行分析,完成毕业论文并在老师的指导下对论文进行修改。
4. 研究创新点
藻蓝蛋白为自然界中天然存在的物质,具有无毒、高效的特点,而且藻蓝蛋白的药理活性非常广泛,各种活性相关联。不仅具有抗癌、抗肿瘤方面的活性,而且还能清除自由基从而起到保护机体免收各种损伤的作用。通过对藻蓝蛋白抗氧化活性的研究,为进一步利用这种特性进行食品、医药保健品等方面的研究奠定基础。
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