植物内生细菌Pn2降解菲的条件优化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

多环芳烃（pahs）是由2个或2个以上苯环组成的土壤环境中常见的一类重要持久性有机污染物，其特点是疏水性强、难于降解。

我国土壤有机污染严重。

其中多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons, pahs)更是土壤环境中常见的一类持久性有机污染物，作为疏水性有机污染物，土壤中pahs可被植物吸收并在植物体内积累，并可通过食物链富集，进而危害农产品安全和人群健康[1-2]。

2. 研究的基本内容和问题

1) 研究目标：在明确植物内生细菌可在植物体内定殖且其对PAHs具有良好的降解效果的前提下，研究各种环境因素如温度等对降解效果的影响，从而优化降解条件，确定相对较优的降解条件，从而更好地为发展内生菌调控植物PAHs污染的修复技术、合理利用污染土壤资源、保障农产品安全等提供基础依据。

2) 研究内容：a. 污染强度、温度、pH、通气量、接种量、外加碳氮源等对菌株Pn2降解菲的影响；b. 确定较优的降解条件；3) 拟解决的关键问题：a.明确可能影响植物功能内生细菌降解PAHs的环境因素；b.明确各因素对植物功能内生细菌降解PAHs的影响；c.明确各环境因素的最优选择范围。

3. 研究的方法与方案

1) 拟采取的研究方法：利用生物摇床进行单因素实验，利用高效液相色谱(hplc)测定样品中pahs的含量，使用uvmini-1240紫外分光光度计测定菌液的od值从而比较生物量大小。

2) 技术路线：见附件3) 实验方案：(1)菌悬液配制将pn2的单个菌落接种于1/10lb培养基中，30℃和150rpm下振荡培养18h，10000rpm离心3min，弃尽上清液，用pbs清洗菌体2次后，msm培养基重新悬浮菌体细胞，调整菌体浓度到od600=1。

(2)各环境因素对pn2降解pahs影响的研究①　温度：在msm培养基中加入一定量的菲丙酮溶液，使瓶中菲浓度为50mgl1，以5%接种量加入菌悬液，于不同温度下，150rpm培养2d，整瓶取样，测定细菌生长量和培养液菲浓度。

4. 研究创新点

(1)与传统的物理、化学处理方法相比，微生物降解pahs具有投资低，效益高，应用简便等优点。

目前用于降解pahs的功能微生物主要有三类：土著微生物、外来微生物及基因工程菌，而关于植物内生细菌降解pahs的研究报道却相对较少。

(2)以本实验所用菌株pn2为例，初步探明了各种环境因素对其降解pahs的影响。

5. 研究计划与进展

2017年4月1日-2017年4月10日1.配制菌悬液；2.研究温度对Pn2降解PAHs的影响；3.完成温度影响的数据分析2017年04月11-2014年04月30 1.完成Ph对Pn2降解PAHs的影响； 2.完成通气量对Pn2降解PAHs的影响； 3.完成污染强度对Pn2降解PAHs的影响2017年5月1日-2017年5月15日1.完成外加碳源对Pn2降解PAHs的影响； 2.完成外加氮源对Pn2降解PAHs的影响； 3.完成接种量对Pn2降解PAHs的影响；