植物酯酶的固定化及酶学性质的研究开题报告

1. 研究目的与意义

植物酯酶源丰富，取材方便，制备简单，可利用植物酶中的植物酯酶的抑制技术测定果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药。

而酶液不易保存，适用范围有限，本文拟探讨影响固定化效果的重要影响因素，如吸附量、吸附pH、温度等，为乙酰胆碱酯酶的广泛应用提供了科学依据。

2. 国内外研究现状分析

固定化酶或细胞是20世纪60年代发展起来的一项新技术，其应用研究涉及工业、医药、食品、化工、能源开发等各个领域。与游离酶相比，固定化酶或细胞具有反应速率快、稳定性好、使用寿命长、可重复利用等优点，因此，固定化酶或细胞技术具有广阔的发展前景。酶的固定化方法主要有吸附法、包埋法、共价键合法和交联法等。而国外报道用金属螯合作用力等方式固定胆碱酯酶，这些固定方式酶活力损失更小，并且稳定性也较好，对于抑制后酯酶活力恢复问题，国内外都进行了一些研究，取得了一定的进展。

酶抑制法测定有机磷农药残留是根据有机磷农药的毒性对酶分解底物的抑制作用进行的，其酶源有来自动物的胆碱酯酶和从植物中提取的植物酯酶，动物胆碱酯酶法是基于有机磷农药的毒性抑制乙酰胆碱酯酶催化底物水解生成乙酸和胆碱。后者与5,5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸反应，生成黄色产物5-硫代-2-硝基苯甲酸，其在410nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。

2004年黄志勇等比较了快速测定蔬菜中有机磷农残的胆碱酯酶抑制法和植物酯酶抑制法,并通过正交实验优化了两种酶抑制法的测定条件，结果发现两种酶抑制快速测定方法均可用于蔬菜中有机磷农残的测定。但植物酯酶法测量精密度更胜一筹，植物酯酶与动物酯酶均可用于蔬菜中有机磷农药残留的快速测定，而且两种酶抑制法测量的精密度都较好，准确度也相当。与动物酯酶相比，植物酯酶的酶活、抑制程度等各项指标均不逊色，此外,植物酯酶具有来源方便、成本低的优势。

3. 研究的基本内容与计划

1、选用麦草粉固定小麦酯酶，分别测定不同温度、pH值、时间和加酶量条件下固定化效果。

2、比较游离酯酶和固定化酶的酶学性质，最适温度、pH，表观米氏常数，最大酶促反应速度。

3、比较两种酶的酶活力、热稳定性和pH稳定性。

实验方案设计合理，数据记录详细、分析准确，图纸规范。

4. 研究创新点

通过改变不同温度、时间、pH值和加酶量等条件，使得小麦酯酶的固定化效果得到不断优化。