单宁酸的酶法水解工艺及单宁酶酶学性质的研究开题报告

1. 研究目的与意义

五倍子单宁是一类水解单宁，为没食子酸与不同样式葡萄糖结合的混合物。五倍子单宁具有广泛的生物活性，其水解产物没食子酸则是一种重要的化工原料，可用于有机合成、涂料、染料、医药、食品、化工、制革、日化、农业、矿产等方面。传统的以五倍子单宁制取没食子酸的方法包括酸法和碱法，但具有反应条件剧烈，污染严重等特点。

单宁酶(tarlseEC3.1.1.20)是一种水解酶，能水解单宁中的酯键和缩酚羧键生成没食子酸与葡萄糖。在黑曲霉、米曲霉及酵母等微生物中均已经发现，是一种诱导酶。它在食品工业、啤酒工业、饲料加工业特别是制备食品抗氧化剂没食子酸丙酯，处理茶抽提物、茶饮料的斡后浑和啤酒沉淀方面有重要的应用价值，具有高效、专一、无副反应等特点，是一种用途较广的酶，因而备受人们青睐。提高单宁酶的酶活，扩大其生产规模，对扩大单宁酶的工业应用具有重要的意义。

2. 国内外研究现状分析

范超等采用Box-Behnkens试验设计和响应面分析方法，对改性玉米芯固定化单宁酶的条件进行优化；聂光军等为直观、批量、准确测定单宁酶的活力，以单宁酸为底物，溴甲酚绿为显色剂，采用平板显色法测定单宁酶的活力；谷文等研究产单宁酶真菌的筛选及产酶条件；马如意等探讨了单宁酶产生菌的发酵培养基优化；保玉心等根据绕丹宁与没食子酸在碱性条件下显色的原理，在520nm波长下测定吸光值，避开了胞外单宁酶粗酶液中干扰物质的吸收峰波长，建立了一种适合固体发酵所产胞外单宁酶的酶活检测方法；倪田表等通过两步简便而有效的方法分离纯化出电泳纯的单宁酶，其纯度和分子量分别采用高效液相色谱(HPLC)和SDSPAGE法测定。

RintuB等采用混合培养技术从富含单宁酸的基质生产单宁酶和没食子酸，即将丝状真菌米根酶和恶臭曲霉两种酶进行混合培养，产生的单宁酶酶活力和转化率明显优于单独培养的酶活力；BanerjeeD等、EnemuorSC等先后报道了用出芽短梗霉、溜曲霉发酵产单宁酶，对碳、氮源及其它培养条件进行优化，以提高单宁酶产量。YosukeNishitani等以没食子酸甲酯为底物在450nm测定反应前后光密度的变化值来测定活细菌中单宁酶的活力，灵敏度高，可测出单宁酶的活力范围在0.63lOmu／ml，这是传统方法(100一lO00mu／m1)所无法比拟的；RakeshKumar和AshwaniKumar对筛选的单宁酶产生菌进行了分析。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：

1.单宁酶的提取、分离与纯化

2.单宁酶的活力测定

4. 研究创新点

　１）菌株来源不同，得到种类也不尽相同

　２）以土耳其倍子的提取物没食子单宁为诱导物筛选高产单宁酶活性的菌种，并以没食子酸动态产率为指标测定其产酶活力。