论文总字数：23377字

摘 要

臭蚤草为菊科旋覆花族蚤草属植物，分布在我国西藏南部，其全草能镇咳疏肝，清血热，花序有清热、止痛的效用，及驱赶跳蚤的作用。为研究臭蚤草中的化学成分，本文将臭蚤草粉碎，使用95%乙醇冷浸后得总浸膏，将浸膏用石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇分别萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏以及正丁醇浸膏。将乙酸乙酯浸膏使用硅胶柱层析的方法分离得到4个化合物，运用¹H-NMR、¹³C-NMR等现代波谱技术，对化合物进行结构鉴定，这四个化合物分别为：β-胡萝卜苷（Q1）、棕榈酸 16β-羟基羽扇醇酯（Q2）、2,3-dihydroaramaticin（Q3）、4α-羟基桉烷-11(13)-烯-12-酸（Q4）。

关键词：臭蚤草；倍半萜；分离；结构鉴定。

A Study on the chemical constituents of Pulicaria. insignis, a Tibetan medicine for clearing heat and relieving pain

Abstract

Pulicaria. insignis is a plant of compositae, which is distributed in south of Tibet. Its whole grass can relieve cough and liver, clear blood and heat, and the inflorescence has the effect of clearing heat and relieving pain, as well as expelling fleas. In order to study the chemical composition of Pulicaria. insignis, this experiment crushed Pulicaria. insignis to obtain the total extract by cold leaching with 95% ethanol. The extract was extracted with petroleum ether(PE), ethyl acetate(EA) and n-butanol respectively to obtain petroleum ether extract, ethyl acetate extract and n-butanol extract. Use the method of silica gel column chromatography to separate the ethyl acetate extract to get the four compounds. Then use ¹H-NMR and ¹³C-NMR and other modern spectroscopic technology to identify the structure of the compounds. So the four compounds are: β-daucosterol(Q1), lup-3β，16β，diol-3-O-palmitate (Q2), 2,3-dihydroaramaticin (Q3), ilicic acid (Q4).

Key words:Pulicaria insignis Drumm.ex Dunn,Sesquiterpenes,Separation, Structural identification.

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 蚤草属植物的化学成分概述 1

1.1.1 倍半萜类 1

1.1.2 二萜及其苷类 1

1.1.3 单萜类 1

1.1.4 黄酮类 1

1.1.5 挥发油类 2

1.1.6 酚类 2

1.2 蚤草属植物的药理活性研究概述 2

1.2.1 抗菌活性 2

1.2.2 细胞毒性 2

1.2.3 抗癌活性 2

1.2.4 抗痉挛活性 3

第二章 臭蚤草植物化学成分研究 4

2.1 臭蚤草植物概述 4

2.2 臭蚤草植物的化学成分 4

2.3 臭蚤草植物的研究目的与意义 5

第三章 臭蚤草的分离提取 6

3.1 主要药材、仪器和试剂 6

3.1.1 药材 6

3.1.2 实验试剂 6

3.1.3 实验仪器 6

3.1.4 显色试剂 7

3.2 实验原理 7

3.2.1 柱层析法 7

3.2.2 薄层色谱法 8

3.3 实验步骤 9

3.3.1 样品前处理 9

3.3.2 样品分离纯化 10

第四章 臭蚤草中化合物成分的结构鉴定 12

4.1 化合物Q1的结构鉴定 12

4.2 化合物Q2的结构鉴定 12

4.3 化合物Q3的结构鉴定 13

4.4 化合物Q4的结构鉴定 13

第五章 臭蚤草中化合物的物理参数与光谱数据 15

5.1 化合物Q1的物理参数与光谱数据 15

5.2 化合物Q2的物理参数与光谱数据 15

5.3 化合物Q3的物理参数与光谱数据 15

5.4 化合物Q4的物理参数与光谱数据 15

第六章 小结 17

致谢 18

参考文献 19

附录 22

第一章 绪论

臭蚤草Pulicaria insignis Drumm. ex Dunn是菊科Compositea(Asteraceae)旋覆花族Inluneae蚤草属Pulicaria的多年生草本，仅产于西藏南部4000m以上的地域（江孜、拉萨、察日坝、沙伽、尼木、日喀则、南太林）。

1.1 蚤草属植物的化学成分概述

目前国内外已有研究报道的蚤草属植物共20余种，其有多种类型的化学成分，其中倍半萜最多，主要为愈创木烷型、苍耳烷型、石竹烷型、桉叶烷型的倍半萜。其次主要为黄酮和二萜，此外还有一些单萜、挥发油和酚类化合物。

1.1.1 倍半萜类

具有驱逐跳蚤、细胞毒性、抗肿瘤活性等。黄圣卓从藏药臭蚤草Pulicaria. insignis中分离出11个倍半萜，其中包含愈创木烷型、伪愈创木烷型、桉叶烷型、吉马烷型和苍耳烷型。Mossa Muhammad等从 Pulicaria. glutinosa中分到2个新的吉玛烷型(germacrane)倍半萜，命名为puliglen和epoxypuliglene，3个没药烯倍半萜puliglutol、puliglutal、puliglutone，及愈创木烷型倍半萜cyclo-epoxypuliglene，此外还分到一个新的没药烯倍半萜puliglutoic acid。

1.1.2 二萜及其苷类

范华芳从藏药臭蚤草Pulicaria. insignis中分离出两个二萜苷类化合物。Singh等从Pulicaria. angustifolia中分离得到4个克罗烷型二萜，3个seco-nidoresedic acid衍生物以及methyl-5x- hydroxyconyscabroate。Muhammad等从 Pulicaria. glutinosa中分到二萜strictic acid及其两个新的衍生物pulic acid和15 - deoxypulic acid。

1.1.3 单萜类

Bohlmann等从止痢蚤草和Pulicaria. sicula中分离出3个百里香酚衍生物。Zdero等从Pulicaria. sicula中得到2个百里香酚衍生物。

1.1.4 黄酮类

具有抗癌活性；Pares等从Pulicaria. dysenterica的叶子中分离出5个6—羟基黄酮。Feliciano等从Pulicaria. paludosa的地上部分得到3 个黄酮化合物。

1.1.5 挥发油类

其挥发油成分具有抗菌活性，它对蜡样芽孢杆菌、链球菌、普通变形杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌均具有显著的抑制作用。Fadwa等对摩洛哥药用植物Pulicaria. odora L.的挥发油成分中鉴定出27个化合物。

1.1.6 酚类

Feliciano等从Pulicaria. paludoosa的地上部分得到若干简单酚类化合物。Ezoubeiri等用GC - MS分析了摩洛哥药用植物Pulicaria. odora L.的挥发油成分，鉴定出两个酚类化合物2 - isopropyl - 4 - methylphenol 和 isobutyric acid 2 - isopropyl - 4 - methylphenylester。

1.2 蚤草属植物的药理活性研究概述

蚤草属属于菊科旋覆花族，该植物全世界约有100种，遍及于欧洲、南非及亚洲，尤其集中分布在地中海地区，主要用于消炎止痛及驱跳蚤的作用。目前研究发现蚤草属中的很多成分具有很强的生物活性，具备药物开发的潜质。

1.2.1 抗菌活性

Fadwa等测试了摩洛哥药用植物Pulicaria. odora L.的挥发油成分的抗菌活性，发现其对蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）,链球菌（Streptococcus C）,绿脓杆菌（Pseudomonas aeroginosa），普通变形杆菌（Proteus vulgaris），粪肠球菌（Enterococcus faecalis）大肠杆菌（Esherichia coli）均具有显著的抑制作用。

1.2.2 细胞毒性

Triana等通过MTT实验测试了从Pulicaria. canariensis中分离的化合物的细胞毒性，发现其中的倍半萜pulicanone对人髓性白血病细胞系（HL-60）表现出细胞毒性。通过显微镜观察显示其毒性产生是由细胞核病变、胱门蛋白酶的活化以及DNA修复酶PARP-1的分裂导致的。2008年，对蚤草属植物Pulicaria. crispa的生物活性研究发现其所含倍半萜成分对人膀胱癌细胞系（EJ-138）表现出细胞毒性，最低抑制浓度为（）。

1.2.3 抗癌活性

1988年研究发现植物Pulicaria. crispa中得到的化合物axillarin具有抗癌活性，通过培养仓鼠胚胎细胞苯并（a）芘代谢实验结果显示axillarin在浓度为25mg/ml时能减少细胞对苯并（a）芘的代谢。

1.2.4 抗痉挛活性

通过研究发现阿拉伯植物Pulicaria. glutinosa具有抗痉挛作用。

第二章 臭蚤草植物化学成分研究

2.1 臭蚤草植物概述

臭蚤草生于山脊岩石上，常见于石砾坡地和草丛中，海拔4000-4310m，根状茎粗壮、多分枝，“成片丛生，植物有粘液，具恶臭”，为西藏特有的药用植物。全草味苦性凉，具有镇咳舒肝，清血热，透骨蒸的作用。用于肺痨咳嗽，两肋疼痛，劳热骨蒸，花序有清热、止痛的功效，还有驱跳蚤的作用。

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