1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1国内外研究动态以及选题依据
民以食为天，食以安为先。随着全球经济的不断发展，民众生活水平的不断提高，人们对于食品的安全和卫生提出了更高的要求。食品从原材料处理到成品加工，到最后流入市场，在此过程中每一环节都可能出现微生物污染的情况，进而导致摄入后引发食源性疾病，危害人们的身体健康。目前，食品安全已经成为了世界范围内广泛关注的问题，而微生物污染是影响食品安全最重要的因素，由食源性致病菌导致的各种疾病也逐渐成为食品领域的焦点。2019年who调查中显示，全球在食用受污染的食物下导致患病的人预计有6亿人（每10人中就有1人），而死亡人数达到42万。其中5岁以下儿童患病比例可达40%，每年有12.5万人死亡。统计2014-2018年我国多地的食源性致病菌种类及数量，数据结果显示，在总共统计的10类11223份在售食品的食源性致病菌检测数据中，检测出食源性致病菌（包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希菌）共6种，总检出率最高的依次是水产品（19.48%）、米面制品（15.62%）、餐饮食品（12.12%）和豆制品（12.00%）[1]。因此，我国在售食品普遍存在食源性致病菌污染情况，形势严峻不容乐观。加强食品中微生物的污染情况分析，建立有效的检测方法极为必要。
大肠埃希氏菌（escherrichia coli, e.coli）为一种革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，兼性厌氧，有鞭毛，具有运动性。广泛存在于人和动物肠道、环境及食物中。按照对应生物学特点，致病性大肠杆菌可分为6大类：肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic e.coli, epec）、肠出血性大肠杆菌（enteropathogenic e.coli, ehec）、弥散黏附性大肠杆菌（daec）、肠聚集性大肠杆菌（enteropathogenic e.coli, eaec）、肠产毒素性大肠杆菌（enteropathogenic e.coli, etec）、肠侵袭性大肠埃希杆菌（enteropathogenic e.coli, eiec）[2]。其中大肠杆菌o157是一种重要病原菌，动物为其重要的传染源，可于宰前感染，较常见的有牛、鸡、羊、狗、猪等，动物的粪便中也常常能够分离出o157∶h7 大肠杆菌。是一种严重威胁人群身体健康和公共卫生安全的食源性致病菌，人群感染此菌后经常患有严重的腹部绞痛和出血性腹泻，并且仅十分之一的患者会发展为溶血性尿毒综合征（hus），严重者甚至发展为血小板减少性紫癜（ttp）[3-4]，死亡率高达30%[5]。在我国e.colio157:h7是现有的对国民健康具有重大威胁的致病原之一[6]。因此如何实现大肠杆菌的实时快速检测是当前研究的主要热点。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究的目标、内容
1）筛选特异性靶点：利用ncbi、notepad 等程序进行靶点的筛选；
2）靶点的特异性验证：利用国标gb4789.6-2016食品安全国家标准中致泄大肠杆菌的检测方法，设计自筛靶点的引物，对种间以及种内菌株进行检测；
3. 研究的方法与方案
1 研究方法以及实验方案
1.1 研究方法
主要检测方法：hrm-rt-pcr检测技术：
4. 研究创新点
1）大肠杆菌基因组信息量庞大，目前尚且存在大量未发掘的特异性靶点，且不同靶点的序列组成对检测效率也有一定能够的影响；本研究基于大肠杆菌O157的基因组序列及生物信息学手段从中发掘出新型的特异靶序列；
2）本实验建立以HRM-RT-PCR技术为主的大肠杆菌分子快速检测方法，简便，快捷，敏感性高，成本低，非常适合大量样品的实时快速分析。
5. 研究计划与进展
2019年7月-2019年9月：查阅文献，确定课题基本的实验思路与技术路线，完成特异性靶点的筛选；
2019年9月-2019年11月：完成文献综述的撰写、对自筛靶点特异性的验证；
2019年11月-2020年1月：完成染料的选取、hrm-rt-pcr检测体系的优化并且书写开题报告；
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