1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
mirna是一种新型内源性、长为18-23nt的单链非编码rna[2]。mirna的特点是序列具有高度保守性、表达具有时序性和组织特异性。研究表明，mirna是细胞内重要的基因表达调控因子，广泛参与细胞增殖、分化和凋亡、体内稳态、细胞因子反应、病毒防御以及耐受诱导等， mirna的缺陷则与肿瘤形成以及其他类型的疾病有关。
mirna基因被rna聚合酶Ⅱ转录，生成一个pri-mirna的颈环，随后由dgcr8识别，并被rnase iii酶drosha加工，形成pre-mirna，pre-mirna被rnase iiidrosha裂解，生成~22ntmirna双链，mirna双链中的后随链被降解生成成熟的mirna，也有部分mirna在pri-mirna加工时依赖argoraute蛋白。最终mirna主要通过靶标mrna序列的3’-utr的碱基配对，从而发挥作用[3]
机体抗病毒感染的天然免疫主要有两条信号通路：一条是通过 tlrs受体识别进入细胞体内的病毒；另一条则是通过rna解旋酶rlr受体识别细胞质内病毒的双链rna分子。近年来的研究发现宿主mirna可以调控肝炎病毒、流感病毒以及人类免疫缺陷病毒等多种病毒在宿主细胞内的感染和复制过程[4]。conrad研究发现mir-199a可以抑制 hcv病毒的复制[5]；ahluwalia则发现宿主mir-29a可以下调hiv-1病毒 nef 蛋白的表达，进而干扰病毒的复制[6]；pareek证实mir-155可以抑制日本脑炎病毒的复制，并负调控天然免疫的应答[7]。以上研究结果提示宿主的mirna可以抑制病毒的感染和复制。
2. 研究的基本内容和问题
本课题着重研究gga-mir-2131对鸡的dc细胞的影响，目标在于寻找并证明这gga-mir-2131在鸡树突状细胞的wnt和ca通路中的靶基因，并初步探究gga-mir-2131调节的这2个通路对鸡树突状细胞发育等功能的影响。
本研究的具体内容有：靶基因的预测和筛选，过表达载体和抑制对照的构建，通过流式细胞术初步探究这两个通路对树突状细胞发育的调控，靶基因的预测和筛选。荧光实时定量pcr初步证明微rna与靶基因相互作用，蛋白质印迹法探究微rna对相关蛋白表达量的调控，双荧光素酶报告基因实验进一步证明微rna与靶基因相互作用，。
本实验的关键问题主要在于：1.过表达载体的构建，pcr条件难摸索，培养细胞测序周期长2.从鸡骨髓中获得足够多的骨髓细胞并将其诱导为树突状细胞，收集到足够多的rna样和蛋白样以进行荧光实时定量pcr和蛋白质印迹法实验，主要问题是处理组多，实验周期长，细胞易污染；3.蛋白质印迹法操作难度对较大，耗时较长，蛋白样易浪费
3. 研究的方法与方案
1、研究方法
1.1过表达载体的构建和抑制剂的合成
1.2骨髓原细胞诱导培养成dc细胞
4. 研究创新点
本项目将紧密围绕禽流感病毒的传播与防控等国家重大需求，IBV病毒作为影响禽类的冠状病毒，对家禽鸡有巨大经济影响，目前新型冠状病毒威胁着人类的生命安全，对经济也产生了巨大的影响，研究冠状病毒是当下需要解决的难题，经预测分析gga-mir-2131对focal adhesion（粘附斑激酶）和Endocytsis（内吞作用）有调控作用，与病毒入侵和转移有关，具有较高的研究价值。
5. 研究计划与进展
2019年9月-2019年10月
1）根据导师发表文章在8个mirna中筛选出具有研究价值价值的mirna
2）构建预测的mirna的表达载体；
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