胡萝卜中CYP97B2基因的克隆分析和遗传转化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 本课题的意义

类胡萝卜素种类较为丰富，目前已经发现的天然类胡萝卜素已有700余种。类胡萝卜素不仅能够呈现出丰富多彩的颜色，而且对人类具有重要的健康价值。迄今为止，已有较多关于类胡萝卜素种类、合成途径及相关影响基因的研究成果。

在园艺作物（花卉、水果和蔬菜）中，产品颜色代表了一个重要的质量特征，从而增强了产品多样性和市场细分机会[1]。目前许多类胡萝卜素生物合成的研究集中在果实、种子和花器官中不同颜色的发育，如柑橘、番茄、胡椒、玉米、万寿菊、菊花以及水稻[2-11]。对地下器官的大多数研究集中在马铃薯块茎上，对根中类胡萝卜素合成的控制途径知之甚少[12]。因此，研究胡萝卜中类胡萝卜素合成机理，具有重要的意义。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

在胡萝卜中过量表达cyp97b2基因以验证其的功能。

研究内容

3. 研究的方法与方案

（一）研究方法

1.分析cyp97b2基因在‘黑田五寸’（橙色）和‘齐头黄’（黄色）肉质根中的表达量

种植‘黑田五寸’（橙色）和‘齐头黄’（黄色）, 在30、60和90天的时候对肉质根取样，测定其类胡萝卜素含量，并利用实时荧光定量pcr检测cyp97b2基因的表达量。分析cyp97b2基因表达与类胡萝卜素合成的相关性。

4. 研究创新点

目前针对 CYP97家族基因的研究非常有限，并且也都局限于CYP97A亚家族基因和CYP97C亚家族基因，而且研究内容和成果极为有限。因此，CYP97家族的其他亚家族基因对类胡萝卜素的作用机制仍然有待进一步的深入研究。与此同时，国内外与CYP97B2直接相关的研究论文很少。因此，该基因具有很大的研究价值且研究所获得的成果将会为今后的研究打下坚实的基础。

5. 研究计划与进展

2019.05——2019.09 胡萝卜种植、不同品种dna提取、dna差异序列分析、载体构建。

2019.09——2019.10 提取rna、荧光定量表达分析、胡萝卜转基因。

2020.03—— 2020.04 获得转基因胡萝卜、观察测量、分析得出结论。