1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的研究意义:
功能基因组学是后基因组时代的重要研究内容,主要研究生物体内各基因的生物学功能。构建饱和的基因突变群体是分离、鉴定基因功能最直接、最有效的方法。因此,突变体库的构建是功能基因组学的基础。传统的方法是通过功能缺失突变体来分离基因并研究其功能,但是,对于存在着基因功能冗余现象的基因家族或者对于那些植物生存所必需的基因,功能缺失突变往往很难进行研究。此外,对于由数量性状位点控制的性状,无法用单基因的缺失来获得突变体,所以功能获得突变显得特别重要。
真空渗入法自产生以来,在其它作物上的研究很少。现有的有关研究也只是适用性研究。本课题将该方法用于不结球白菜可以为白菜类作物乃至十字花科作物高效真空转化基因提供了借鉴。而通过激活标记技术构建了功能获得突变体库,并从中筛选感兴趣的突变体,可以为进一步分离、鉴定相关的基因并研究其功能打下基础。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:
1、为不结球白菜的离体再生体系的优化以及转基因提供基础和依据;
2、筛选可利用的不结球白菜突变体资源。
3. 研究的方法与方案
研究方法:
1、种植、测定、筛选;
2、真空渗入法。
4. 研究创新点
特色或创新之处:
激活标记技术在不结球白菜生长发育的研究中具有重要的作用。传统的功能缺失突变缺乏明显可见的表型,重要基因的功能缺失突变往往导致植株早起致死,而无法继续研究。次技术在不结球白菜基因功能的研究中会显示出极大的优越性。
渗入转化法避开了组织培养过程,以生长中的植株作为转化受体,从后代种子中直接筛选抗性株,具有简便、快速、可靠等优点,为植物的转基因工作开辟了新的途径。
5. 研究计划与进展
研究计划:
农杆菌介导的转化广泛应用在植物基因转移中。根癌土壤杆菌介导的转化依靠植物对农杆菌侵染和来自双元载体的t-dna的插入易感受性进入植物细胞。以不结球白菜植株为实验材料,以含有激活标记质粒pski015的农杆菌通过真空渗透法进行转化,并以抗除草剂basta为筛选标记,构建了不结球白菜的激活标记突变体库。
预期进展:
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