1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
意义:碱性丝氨酸蛋白酶是指在 ph 值为碱性的条件下水解蛋白质肽键的酶类,其最适 ph 值一般为 9~11,属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类,除可催化蛋白质水解为氨基酸外,在有机溶剂中还可催化多肽的合成。
目前,碱性蛋白酶广泛应用于洗涤剂、制革、丝绸等工业上,具有不可替代的作用。
该酶来源于细菌、放线菌和真菌中,其中研究最广泛且最深入的是芽孢杆菌的丝氨酸蛋白酶。
2. 研究的基本内容和问题
深入研究该酶的基因序列,设计合适的引物进行特异性的PCR扩增,并将碱性丝氨酸蛋白酶基因依次连接到克隆载体和表达载体上,最终使其在枯草芽孢杆菌中表达。
之后对该酶进行纯化以及活性分析。
3. 研究的方法与方案
研究方法:本文采用基因重组的方法,将CC5菌株所产碱性丝氨酸蛋白酶基因整合到枯草芽孢杆菌中,成功构建了基因重组的枯草芽孢杆菌并进行了小量诱导表达,为以后碱性丝氨酸蛋白酶的大量诱导表达以及酶的分离纯化奠定了基础。
技术路线:目的基因扩增表达载体构建重组质粒的转化转化子低温诱导实验方案:碱性丝氨酸蛋白酶基因CC5e的扩增及纯化碱性丝氨酸蛋白酶基因CC5e的TA克隆表达载体的构建重组质粒pMA09-CC5e的转化转化子鉴定转化子的低温诱导及酶活测定
4. 研究创新点
目前研究碱性丝氨酸蛋白酶基因的大多以原核生物为材料,以真核生物为材料的比较少。
因为真核原核酶系统的不同,碱性丝氨酸蛋白酶基因可能在会真核生物中获得更强的表达,获得更多的碱性丝氨酸蛋白酶。
5. 研究计划与进展
2015.3 碱性丝氨酸蛋白酶基因的克隆及克隆载体的构建2015.3 表达载体的构建,基因重组的枯草芽孢杆菌的培养2015.4 碱性丝氨酸蛋白酶的纯化及性质研究
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