菊花蚜虫相关MYB转录因子克隆及表达分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.目的意义 菊花（chrysanthemummoriflorum)为菊科菊属栽培种，原产我国，是我国十大传统名花和世界四大切花之一，在园林应用中占有十分重要的地位，另外菊花还具有药用、茶用、酿用、食用等多种经济用途。

全球消费量仅次于切花月季，居第二位。

然而，菊花在生产过程中易受病虫害危害，严重影响其产量和品质。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标、内容和拟解决的关键问题1.1研究目标（1）获得菊花蚜虫相关myb家族基因cmmyb；（2）明确菊花cmmyb在不同品种、不同组织器官中的表达差异及调控表达特性；（3）明确cmmyb基因与蚜虫的关系。

1.2 研究内容1.2.1克隆基因克隆菊花cmmyb基因、分析可能存在的不同转录本：兼并引物设计、rt-pcr扩增、3，5-race扩增，测序、拼接，序列比对、分析可能存在的不同转录本；1.2.2表达特性分析（1） 蚜虫处理菊花南农勋章，取各时间点:0h、3h、6h、12h、24h、48h，并提取各材料各时间点的rna；（2）探讨cmmyb在不同品种、不同组织器官及不同胁迫时间点下的表达特点：不同品种、不同组织器官（根、茎、叶等）中cmmyb1基因表达量的实时定量rt-pcr检测；以及用原位杂交技术对cmmyb1基因在根、叶等中的表达模式进行分析；采用实时定量rt-pcr检测不同胁迫时间点下的基因表达量；（3） 探讨cmmyb与蚜虫的相关性。

1.3拟解决的关键问题（1） 与蚜虫抗性相关的myb转录因子基因的筛选；（2） cmmyb基因克隆和荧光定量表达量的分析；（3）进行实验时把握好各实验材料的苗龄，处理时间及取样时间点。

3. 研究的方法与方案

2.拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析2.1 拟采取的研究方法2.1.1 cmmyb1转录因子基因克隆用trizol rna提取试剂盒提取菊花叶片rna，设计引物经pcr获得转录因子基因中间片段，通过5race和3race获得基因全长。

2.1.2 南农勋章菊花苗扦插 选取整齐一致的野菊脚芽，修剪整理后在蛭石扦插床上生根，约15d后，取回实验室，转入一次性塑料杯中培养，基质配方为园土：蛭石：珍珠岩=2：1：1中，在温室培养至10叶苗龄。

2.1.3实验材料处理蚜虫处理菊花南农勋章（抗性材料）扦插苗。

4. 研究创新点

3.特色或创新之处 从菊花抗蚜品种南农勋章中克隆抗蚜的关键基因CmMYB,通过荧光定量分析阐明其与蚜虫取食的关系，为以后利用基因工程手段调控菊花对蚜虫的抗性奠定基础。

5. 研究计划与进展

4.研究计划及预期进展2014年3-4月：进行文献查阅，设计并得到一个可行的实验方案；2014年5月中旬-10月中下旬：CmMYB基因全长的获得，并对所选择的菊花材料的脚芽进行扦插繁殖，保证得到充足的实验材料；2014年10月下旬-2015年4月中旬：荧光定量PCR，分析和比较在不同胁迫时间点的基因表达量；2015年4月中下旬-5月初：分析处理数据，进行论文的撰写，并完成论文的修改定稿；2015年5月中旬：进行论文答辩。

5.预期研究成果（1） 获得CmMYB基因的全长cDNA序列并登；（2）通过荧光定量PCR检测分析不同胁迫时间点的基因表达量，初步阐述CmMYB基因与菊花抗蚜虫性的相关性。