1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义菊花是菊科菊属多年生宿根草本花卉,原产于中国,现在在世界各国广泛栽培,是我国十大传统名花和世界四大切花之一,全球切花菊消费量仅次于切花月季,居第二位。
菊花品种繁多,全世界近30000种,中国有3000多种。
其花型、瓣型变化极大,色、姿、韵、香四美皆备,具有很高的观赏价值和经济价值其经济产值在世界鲜切花贸易中排列第三。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标1.对拟南芥ft-10突变体进行转基因,获得菊花cmftl3不同转录本的超表达转化材料;2.获得phgw-ftpro::cmftl3、cmftlps1、cmftlps2、cmftlps3和cmftlps4超表达转基因拟南芥阳性植株,观察cmftlps能否回补拟南芥ft-10晚花表型。
研究的内容1.构建phgw-ftpro::cmftl3、cmftlps1、cmftlps2、cmftlps3和cmftlps4超表达载体;2.对拟南芥ft-10突变体进行转基因,获得phgw-ftpro::cmftl3、cmftlps1、cmftlps2、cmftlps3和cmftlps4转基因植株;3.通过rt-pcr技术对转基因植株进行检测并统计成活率;4.对转基因植株进行观察并记录cmftlps转基因株系在相同光周期和温度下开花的时间和抽薹期莲座叶片数;5.分析cmftl3基因多态性序列在拟南芥ft-10突变体中的表达差异及其分子机理。
拟解决的关键问题从分子角度研究菊花开花的分子机理,破解菊花对光周期条件的依赖难题,培育出更多日中性菊花新品种,实现菊花的周年生产。
3. 研究的方法与方案
研究方法南京农业大学园艺学院菊花遗传育种实验室长期从事菊花研究,目前实验室在转基因花卉的组织培养,已经建立起了相应的技术体系,这些技术对于本项目中菊花cmftl3基因多态性的转基因研究打下了坚定的基础。
本实验室已经收集有神马优香菊花品种的材料,均保存于南京农业大学中国菊花种质资源保存中心,常规管理。
并且本实验室已同源克隆了菊花cmftl3基因的4种不同转录本cmftlps1、cmftlps2、cmftlps3和cmftlps4,构建了phgw-ftpro::cmftl3、cmftlps1、cmftlps2、cmftlps3和cmftlps4超表达载体。
4. 研究创新点
通过菊花CmFTL3多态性基因在拟南芥植株体内的超表达,进行拟南芥ft-10突变体互补实验,对菊花CmFTL3基因的多态性进行功能分析。
5. 研究计划与进展
2014年9月-2014年10月获得拟南芥超表达CmFTL3基因的转基因阳性植株;2014年10月- 2014年11月 播种转基因拟南芥T1代和对照组Col-0野生型及ft-10突变体;2014年11月-2014年12月采取各个拟南芥莲座叶片样本提取RNA,进行特异引物PCR鉴定;2015年3月-2015年5月 完成结题,撰写论文。
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