1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
【课题意义】
随着生活水平的提高，人们对于反季节水果的需求量大大增加，果树设施栽培也有了较大的发展，因此提早或推迟果树萌芽成为提高果树经济效益的重要手段，决定果树设施栽培升温时间的关键因素需冷量也成为一个研究热点[1]。需冷量是植物在长期自然演变过程中形成的对休眠期低温量的需求，是落叶果树设施栽培成功的关键之一，只有满足需冷量，才能保证其顺利通过自然休眠[2]。采用破眠剂可以替代部分需冷量，使树木较早解除休眠，开始正常生命活动[3]，从而提早上市，获得好的经济效益。因此，安全高效的破眠剂对于果树设施栽培具有重要的意义，同时，对于果树破眠机理的研究也为探索休眠的机制奠定基础。
【国内外研究概况】
2. 研究的基本内容和问题
【研究目标】
1、获得ga4在果梅休眠解除的适宜施用时期和浓度；
2、测得ga4解除休眠前后h2o2、抗氧化酶活性的变化，以揭示ga4在解除果梅休眠中的作用方式；
3. 研究的方法与方案
【研究方法】
1、探究GA4解除果梅休眠的适宜施用时间和浓度；
按一定的时间间隔采集果梅枝条，水培，施用一系列浓度梯度的GA4，观察破眠最佳浓度和时间；
2、测定施用GA4后果梅休眠解除前后H2O2和抗氧化酶的变化规律；
过氧化氢含量以每克鲜重所含过氧化氢的毫摩尔数为单位[1]。过氧化氢酶活力测定采用紫外吸收法，以每分钟OD值减少0.1定义为一个酶活力单位；过氧化物酶活力测定采用愈创木酚法测定,以每分钟470nm处OD值变化0.01为一个过氧化物酶活性单位；超氧化物歧化酶采用氮蓝四唑法,以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位[2] 。
【技术路线】
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采集材料并分别用GA4、H2O2和水处理，光照培养箱中培养，定时统计萌芽率，同时，每次统计采集芽置于冰箱中保存待测。 |
待发芽率的统计实验结束，确定了破眠的最佳施用时期，选用此时期保存的芽进行H2O2含量和抗氧化酶活力测定。 |
【实验方案】
1、研究GA4用于果梅休眠解除的适宜时期和浓度；
自2014.12开始，每5-7天（视情况而定）到傅家边采集丰后果梅尚未萌发、粗壮、芽饱满的枝条带回实验室，留出一部分剥芽放入冻存管中于冰箱中作为未处理的对照保存，将其余长短大小相似的枝条分到不同的实验组，分别用0、50 μM、100μM、200 μM、300 μM、400 μM GA4处理，以水处理的作为对照，每个处理都有3个以上重复，同时各处理均留出形态较好的一瓶用于拍照记录生长情况，将各组放在光照培养箱中，光/暗时数16/8 h，25 ℃培养，每3天、5天、8天、10天，统计萌芽率，标准是露绿的枝条算作已经萌芽，当萌芽率达到50%时即为打破了休眠，同时，每次统计时均需要将各组剥芽，选择未被水浸湿的芽，每次每个处理采集满8个冻存管，置于冰箱中保存待测。
2、 果梅芽破眠前后H2O2含量和抗氧化酶活力测定。
待发芽率的统计实验确定了破眠的最佳施用时期后，选用此时期0天、3天、5天、8天、10天采集并保存的芽进行H2O2含量和抗氧化酶活力测定。
1过氧化氢含量
取10ml离心管、编号、加入5ml丙酮并称重放入4℃冰箱预冷备用；将研钵、研棒、药匙等放入液氮备用；取果梅花芽样品，用液氮研磨后将花芽粉末迅速转入盛有预冷丙酮的离心管并称重，混匀后用容量瓶定容至10ml；取5ml 3000rpm离心10min,取1ml上清加入5%的TiSO4和浓氨水，3000rpm离心10min、弃上清,洗沉淀三次，用5ml 2mol/L硫酸溶解沉淀，415nm处测吸光值；计算公式
H2O2含量（μmol/g）=CVt/W/Vs
其中C为标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol)，Vt样品提取液总体积(ml)，W植物组织鲜重(g)，Vs测定时所用的样品提取液的体积（ml）。 具体方法参见《植物生理学实验教程》[1]。
2过氧化氢酶活力
采用紫外分光光度计法，以每分钟OD值减少0.1定义为一个酶活力单位。磨样方法参照过氧化氢含量测定，具体步骤参见《植物生理学实验》[2]。
3过氧化物酶活力
采用愈创木酚法测定,以每分钟OD470变化0.01为一个过氧化物酶活性单位。磨样方法参照过氧化氢含量测定，具体步骤参见《植物生理学实验》[2]。
4超氧化物歧化酶活力
采用氮蓝四唑法,以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位。磨样方法参照过氧化氢含量测定，具体步骤参见《植物生理学实验》[2]。
【可行性分析】
石灰氮是目前打破休眠常用的试剂，但其毒害性较大，预实验及前人研究已经证明GA4能够促进果梅休眠解除，对果梅花芽的破眠效果要比石灰氮的效果好，且无毒，配制溶液喷施也比石灰氮涂抹施用简单易行，因此本实验方案具有可行性。
参考文献
[1] 张以顺，黄霞，陈云风．植物生理学实验教程[M]．北京：高等教育出版社．2009：77-80．
[2] 蔡庆生．植物生理学实验[M]．北京：中国农业大学出版社．2013：182-187．
采集材料并分别用GA4、H2O2和水处理，光照培养箱中培养，定时统计萌芽率，同时，每次统计采集芽置于冰箱中保存待测。 |
待发芽率的统计实验结束，确定了破眠的最佳施用时期，选用此时期保存的芽进行H2O2含量和抗氧化酶活力测定。 |
4. 研究创新点
1、GA4可以克服石灰氮毒性大、施用麻烦的弊端，并且破眠效果更好，有望提高果树设施栽培的普及程度；
2、果树休眠解除的途径尚不清楚，本实验可以通过测定GA4施用后各种生理指标的变化来研究休眠解除的途径，为休眠解除的生理机制研究奠定基础。
5. 研究计划与进展
1、2014年12月至2015年1月 采集材料，培养，测定ga4施用的适宜时间和浓度；
2、2015年2月至2015年3月 测定ga4解除休眠前后h2o2含量和抗氧化酶活力变化；
3、2014年4月至2014年5月 进行数据整理，撰写毕业论文。
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