1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义目前,我国经济作物的种植面积已超5亿亩次/年,接近我国总耕地面积的30%,这种高效益、集约化农业生产为农业增产和农民增收提供了有效途径,但常年连作也给土壤带来了严重的问题。
连作障碍(continuous cropping obstacle),是指同一种作物或者近缘作物在同一土壤上长期连续种植,导致产量降低、品质低劣的现象[1]。
随着作物种植年限的不断增加,土壤次生盐渍化、酸化、养分失衡、生态环境恶化等诸多问题逐渐出现,特别是土壤微生物区系的严重失衡。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:1、分离出在黄瓜根际能和解淀粉芽孢杆菌SQR9相互作用的芽孢杆菌2、对分离出的芽孢杆菌进行鉴定及生理生化分析研究内容:1、黄瓜根际芽孢杆菌的分离2、筛选出能和解淀粉芽孢杆菌SQR9相互作用的芽孢杆菌3、对分离出的芽孢杆菌进行鉴定及生理生化分析拟解决的关键问题目标菌株的分离
3. 研究的方法与方案
研究方法1生物膜形成和定量分析实验生物膜分析采用96孔板,菌株sqr9或突变株在lb液体中震荡培养过夜,离心收集菌体细胞,用新鲜的msgg培养液多次洗涤菌体,最后菌体细胞重悬于适量的新鲜msgg培养液中至浓度为od600=0.1,在96孔板的每孔中加入100 μl菌悬液,每个处理至少设置8孔重复,96孔板置于37 ℃静置培养,观察生物膜形成情况。
取样时,取出96孔板,吸出培养液,小心操作,不能破坏生物膜结构,用150 μl磷酸盐缓冲液小心冲洗,加入0.1%(w/v)结晶紫水溶液染30 min,倒出染色液,用去离子水洗2次,自然干燥后,加150 μl乙醇/丙酮溶液(80:20,v/v)溶解吸附于生物膜上的染料,然后测540 nm处的吸光值计算生物膜量。
2 拮抗菌的培养特征及生理生化鉴定拮抗菌的鉴定参照《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠等,2001)和《伯杰氏系统细菌学手册》(krieg and holt, 1984)3菌株的16s rdna序列的测定和鉴定(1)菌体总dna的提取菌体总dna的提取采用高盐法 (miller et al., 1988):从-70 ℃冰箱中取菌种于lb平板上活化,挑取单菌落接种于lb液体培养基中, 于37 ℃、170rmin-1培养过夜, 取4 ml菌液于12000 rmin-1离心3 min收集菌体; 用1.0 ml te重悬菌体,12000 rmin-1离心3 min收集菌体, 加入1.0 ml ten悬浮菌体, 加入54 μl 10% sds和8 μl蛋白酶k (20 mgml-1),45℃水浴4 h。
4. 研究创新点
通过挖掘植物根际原位的芽孢杆菌资源,能更好的了解PGPR的作用机理
5. 研究计划与进展
2016年4月完成实验,目前进展顺利
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