黄瓜CsEXpb1基因的克隆与载体构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

随着生物技术研究手段与方法的迅猛发展,转基因植物研究的作用与意义愈来愈重要。

在农业生产上，通过转基因技术可以培育出高产、优质、抗病、抗虫、抗寒、抗旱、抗涝、抗盐碱、抗除草剂等特性的作物新品种，可大幅度提高单位面积的产量，改善作物品质，缓解世界粮食短缺的矛盾。

植物转基因常用的方法有农杆菌介导法、基因枪法和花粉管通道法。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标通过引物设计，从课题组已有的p-green载体上，通过单基因克隆的方法将p-green基因克隆。

经过测序后得到所需片段，再将其克隆重组获得重组质粒。

目的基因片段和重组质粒同时双酶切后连接获得中间载体，从而使目的基因含有荧光标记基因，并不影响原有启动子及终止子。

3. 研究的方法与方案

实验方案设计本试验是在植物表达载体prok2 基础上进行的，prok2购自拟南芥生物资源中心，载体上携带标记基因 npt-ii( 卡那霉素抗性基因)、camv35s启动子。

但缺乏合适的报告基因，因此想使此载体带有报告基因，必须对载体进行改造。

首先设计引物，从课题组已有的p-green载体上，通过单基因克隆的方法将p-green基因克隆。

4. 研究创新点

特色或创新之处pROK2载体是实验中常用的转基因载体，但并没有包含报告基因。

本实验通过农杆菌介导法向pROK2载体中加入p-Green绿色荧光蛋白基因，这是一种简便、高效、通用、经济的载体改造重构策略，为植物转基因效率的提高提供了新的思维和方法。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展1. 2015年11月至2016年3月：收集相关材料，完成开题报告，制定实施方案，进行预备实验。

2. 2016年3至4月：设计引物，进行克隆以及载体的改造。

3. 2016年4至5月：将重建的载体转入农杆菌并进行荧光验证。