1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
转录因子能够提高植物抗逆性,包括植物抗寒性,植物抗旱和耐盐性,植物抗病性等。
低温、干旱、土壤盐渍化和病虫是影响农业生产的严重问题。
在有关植物抗逆境的众多研究中,科学家也克隆了许多不同来源的与抗逆境相关的功能基因并把它们转化到植物体中,但所取得的效果并不理想[1]。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:在不同浓度的铝、氟的胁迫下, 验证myb类转录因子在茶树体内的功能及表达模式的变化,为茶树转录组的进一步分析提供一定的数据参考。
研究的内容:以数据库中茶树myb序列为研究对象,用不同浓度的铝、氟处理的茶苗为实验材料,提取茶苗根和叶中的rna,进行荧光定量分析。
拟解决的关键:myb类转录因子在茶树中的功能验证。
3. 研究的方法与方案
研究方法: 通过myb类转录因子在茶树体内的表达模式的变化,验证其在茶树体内的功能。
技术路线: 一、序列分析①数据库中的myb序列进行blastx比对;②拟南芥myb与茶树myb构建系统进化树,进行同源性分;③利用meme鉴定茶树myb保守性结构域;④通过实时荧光定量,分析它们在茶树中的表达模式。
二、实验分析①用不同浓度的铝、氟处理茶苗;②在不同时间点分别剪取茶苗根和叶,并保存在-80℃备用;③分别提取根和叶的rna,反转录,进行pcr反应;④通过实时荧光定量,分析它们在茶树中的表达模式。
4. 研究创新点
(1)项目中所涉及的茶树中抗旱相关的myb类转录因子,大部分基因的功能未见研究报道。
(2)结合茶树表达谱和拟南芥转基因功能分析,利用模式植物进行茶树相关抗逆转录因子的功能研究。
研究所获茶树来源的基因可作为目的基因直接提供给茶树或其它作物的遗传转化。
5. 研究计划与进展
研究计划:(1)2015年9月,课题的选定与可行性分析;(2)2015年9月-2015年11月,利用软件分析茶树MYB类转录因子; (3)2015年11月-2016年1月,用不同浓度的铝、氟培育茶苗,不同时间点取样,提取茶苗根和叶的RNA,进行反转录,PCR反应;(4)2016年1月-2016年2月,撰写开题报告与文献综述;(5)2016年2月-2016年3月,筛选出的茶树MYB转录因子进行实时荧光定量,分析其在茶树中的表达模式,以此验证其在茶树中的功能;(6)2016年3月-2016年5月,整理结果,撰写毕业论文。
预期进展:筛选出的茶树MYB转录因子,在不同铝,氟浓度处理下的茶树根和叶中呈现出明显的上调或下调表达或不表达,初步阐明茶树中MYB类转录因子的调控网络。
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