菊花CmHsf4A基因的克隆及其功能鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 本研究的目的意义

土壤盐渍化是一个世界性的环境和生态问题。全球大约有10亿公顷的土地遭受盐渍化侵害，占陆地面积的7%。在我国约有盐渍化土壤0.369亿公顷，占现有耕地的1/4。近几十年来由于不合理的农业行为使得盐渍化的问题越加严重^[1]。盐害已成为所有非生物胁迫中影响栽培植物生长和产量的主要因素之一，盐胁迫也因此被认为是限制土地使用的关键农业问题。但是，对于盐渍化土壤的改良由于受到自然因素、资金条件的严重限制，效果不明显，且适用范围很有限^[2]。

菊花(chrysanthum morifolium)为菊科菊属草本植物，原产我国，在我国已有三千多年的栽培历史^[3]，为我国的十大名花之一。因其色彩鲜艳，形态多变而深受我国广大人民的喜爱。菊花居世界四大切花之首，切花菊的销量在我国的鲜切花销售量中位于第四。我国从上世纪八十年达开始了切花菊的生产，并加入了高效农业行业。经过多年的研究与实践，我国的切花菊产业迅速壮大，生产技术可达到周年供应的水平^[4]。但许多菊花品种对环境胁迫缺乏抗性，沿海及我国北方的干旱和半干旱地区由于盐渍化环境限制了其栽培和园林应用的质量，集约化切花菊设施生产中的土壤次生盐渍化也对其品质和产量造成不利影响^[2]。

2. 研究的基本内容和问题

1.项目研究目标、内容和拟解决的关键问题

1.1研究目标

(1) 开展菊花cmhsfa4基因的克隆及表达特性分析；

3. 研究的方法与方案

2.1研究方法

(1) rna提取及反转录 叶片(0.15g)液氮研磨成粉，加入1ml rnaiso reagent完全覆盖，匀浆转移至2ml离心管，室温静置5min后12000rpm 4℃离心15min；上清液加入200μl氯仿震荡混匀，静置10min后，12000rpm离心15min，视情况多次抽提；吸取上清于新离心管，加入等体积异丙醇颠倒混匀，静置10min后12000rpm离心10min，弃去上清加入75%乙醇漂洗rna后12000rpm离心5min，弃去乙醇待其完全挥发后加入25μl depc水溶解。稀释10倍用于rna完整性检测和浓度测定，达到能够用于反转录标准后-70℃保存。rna反转录得到的cdna作为扩增基因全长的模板，具体反转录过程参照试剂盒说明书，普通pcr检测反转录获得的cdna质量。

(2) 表型分析 分别选取6-8片叶期、长势一致的未转基因的菊花神马（wt）和超表达cmhsfa4转基因菊花扦插苗各50株，用200mmoll^-1nacl浇灌处理2周，之后将菊花的根洗净，栽种于新的土壤（营养土：蛭石，1：1）中，正常浇水管理2周，统计存活率并拍照。分别于处理前和处理后48 h取样用于生理指标的测定，取样部位为从茎最底端向上数第4-5位叶，并进行生物学重复三次。

4. 研究创新点

3．本项目的创新之处

目前关于HSFs的研究越来越多见包括热胁迫在内的多种逆境胁迫，而关于菊花HSFs的耐盐性未见详细报道。本实验着力于探究HSFs与菊花耐盐性的关系，以及初步探究HSFs抗蚜的机理，最终为菊花分子育种提供理论基础。

5. 研究计划与进展

4. 项目研究计划及预期进展

本研究预期在14个月内完成，2016年3月-2017年5月。

①2016.03：进行前期工作，查找文献资料，完成研究方案的设计；