miR-210的靶基因鉴定与分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 本课题研究意义

mirna是一种长约为18~25nt的内源性小分子非编码rna，其自身结构中不包含开放阅读框，因而无法编码蛋白质。mirna是由一小段包含近似于发夹状结构、长约70~80nt的单链rna前体经过dicer酶的剪切加工作用后形成。在大多数动物体内，mirna分子能够与目标靶基因mrna分子的3'-utr区域互补配对，阻遏mrna的翻译过程或造成其降解，从而对靶基因翻译后的蛋白质表达水平表现为负调控^[1]。而mirna自身与目标靶基因的关系也非一一对应，即某一mirna能调控多种靶基因的蛋白质表达水平，而某一靶基因的3'-utr区域也可以与不同mirna配对结合，由此可以推断某一靶基因的蛋白质表达水平是多种mirna共同发挥调控作用的总和。

mir-210的位置处于人类第11号染色体上，其表达产物存在于各种细胞中。有预测数据表明，人类细胞中约有1/3能够编码蛋白质的基因都受到mirna分子的调控。 mirna分子在其表达过程中，表现时序性、进化过程中高度保守性及组织特异性等特征^[2]。研究发现它在一定程度上能够调控细胞增殖分化及凋亡、细胞进化、胚胎发育、血管形成、肿瘤发生等很多生理及病理的基本过程。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标：

本课题旨在研究mir-210的靶基因并对其进行序列分析。

2.研究内容：

3. 研究的方法与方案

1.研究方法：

（1）293t细胞培养：

293t细胞的培养选用dmem培养基，并添加10%胎牛血清置于37℃、5%co₂培养箱中培养，1~2d换液一次。在转染前1d将293t细胞进行传代培养，细胞密度为110⁶/皿（100mm培养皿）。

4. 研究创新点

miR-210的表达上调与多种实体肿瘤的不良预后有关，对miR-210展开全面研究可能有利于疾病诊断及缺血性相关疾病和肿瘤的治疗。

但目前国内外对miR-210的研究还不够全面，寻找到的miR-210靶序列在后续试验中大多被证明是错误的。本课题旨在研究miR-210的靶序列并对其进行测序，从而有利于进一步探究miR-210的功能和作用原理。

5. 研究计划与进展

2016.12-2017.1 完成申报开题及实验前期准备工作

2017.2-2017.3培养293t细胞并构建质粒，使flag-ago2蛋白过表达

2017.3-2017.4 转染后继续培养，测定rna序列并进行分析