分离、鉴定能形成自然感受态的枯草芽孢杆菌开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

枯草芽孢杆菌作为芽孢杆菌的模式菌株有着较为广泛的研究^[1]。同时该菌广泛应用于工业、农业、医疗等领域，与人类关系密不可分。枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。单细胞呈短杆状、无荚膜、周生鞭毛、能运动。自然条件下，可以自发形成感受态。所以根据这一特性，枯草芽孢杆菌常用于外源dna的转化，构建重组子。

1．枯草芽孢杆菌分离、纯化与鉴定

湖泊、土壤是枯草芽孢杆菌最主要的样品来源。所以枯草芽孢杆菌的样品收集容易，分菌过程也相对简单。纯化的过程比较单调，挑取目的菌株接种到新的培养基上进行在培养，需要重复多次。目的是纯化芽孢杆菌，使菌落形态较纯。之所以对枯草芽孢杆菌的鉴别与鉴定，是为了确保其安全性和可靠性^[2]。传统的生理生化特征对枯草芽孢杆菌的分类与鉴定主要体现在菌落形态特征、显微镜下单细胞特征以及一些化学指标的测定^[3]。对于枯草芽孢杆菌的多年研究，越来越来多的菌种被发现。表面性的鉴定方法已经显得比较无力。随着分子生物学的发展，人类发现不同菌种都包含特定的保守序列，这对于通过基因层面来鉴定菌种有重大意义。不同菌种内都包含着在进化过程中高度保守的基因序列，例如核糖体上16s rrna上存在一段高度保守的基因序列，16s rdna就是编码该亚基的基因，现已作为细菌系统分类研究中最有用和最常用的分子钟。当然分子生物学方法也并不完美，试验条件难以控制，很有可能出现非特异性扩增，从而影响实验结果。通过将生理生化特征与分子钟相结合，优势互补，从而达到准确鉴定菌种的目的。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题

1 研究目标

1.1 本课题主要针对枯草芽孢杆菌菌群的分离与鉴定作研究。

3. 研究的方法与方案

1 研究方法

1.1主要通过对枯草芽孢杆菌的生理生化指标测定以及16s rrna和功能基因的序列分析达到鉴定的目标。

1.2通过转化的质粒dna的抗性基因筛选阳性转化子，并比较各样品菌株转化效率。

4. 研究创新点

1 由于大部分枯草杆菌的16s rrna的基因序列相似性高达99.5%。所以采用双重鉴定方法，寻找相对保守的功能基因，以此来准确鉴定。

2 本实验样品有土壤和牛奶两种。由于培养基数目较多，且培养时间至少24 h。一次性做完工程量较多，数据记录繁琐。所以将两种样品的实验穿插进行，以提高效率，节约时间。

3 牛奶样的分菌，样品拟做变质处理。用以增加变量，丰富实验结果。

5. 研究计划与进展

1 目前阶段正处于采集样品阶段，耗时一周

2 计划将土样和牛奶样的分菌纯化穿插进行，调高实验效率，预计耗时1.5个月；

2 测序鉴定与数据整理与分析预计耗时0.5个月；