细胞分裂素受体基因在森林草莓叶片衰老中的作用开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

草莓，原产南美，中国各地及欧洲等地广为栽培，在世界小浆果生产中居于首位。

它具有柔软多汁、酸甜适度、营养丰富、外观美丽、香气浓郁等特点，因而在国际水果市场备受青睐，有水果皇后之誉。

它是果树中结果最快、成熟最早、株体最小、繁殖最易、周期最短、管理方便、病虫较少、加工容易、便于调控的一种浆果树种。

2. 研究的基本内容和问题

本研究的目标是通过对野生型和细胞分裂素受体基因受干扰的转基因森林草莓的叶片进行黑暗处理，探讨不同细胞分裂素受体基因在叶片衰老过程中的作用。

草莓本身有4个细胞分裂素受体基因。

实验前期通过三个载体分别对细胞分裂素受体基因2（fvehk2a和fvehk2b）、细胞分类素受体基因3（fvehk3）和细胞分裂素受体基因4（fvehk4）,进行rnai干扰，得到转基因株系。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1、离体叶片的培养：设置ck浓度梯度（3个浓度：0mol/l、0.001mol/l、0.01mol/l），让森林草莓的叶片（野生型和转基因型）在不同ck浓度的培养基中置于黑暗环境下培养，观察叶片衰老黄化程度，并比较。

ms培养基配方：①ms大量（取50ml/l）：nh4no3 33000mg/l ; kno3 38000mg/l ; mgso47h20 7400mg/l ; kh2po4 3400mg/l.②ms大量（取50ml/l）：无水cacl2 6.64g/l.③ms微量（取5ml/l）：ki 166mg/l ; h3bo3 1240mg/l ; mnso4h2o 3380mg/l ; znso47h2o 1720mg/l ; namoo42h2o 50mg/l ; cuso45h2o 5mg/l ; cocl26h2o 5mg/l..④ms铁盐（取5ml/l）： feso47h20 2780mg/500ml ; na2edta2h2o 3730mg/500ml.⑤肌醇（取5ml/l）：20g/l. 2、叶绿素浓度的测定:褪绿现象是绿色器官衰老的显著标志,其中涉及的叶绿素急速降解是植物衰老的特征性生理生化过程。

近十余年来, 叶绿素降解的主要生化途径(pao途径)已基本被阐明。

4. 研究创新点

本研究是首次对森林草莓叶片衰老现象的研究。

此外，也是首次通过调控细胞分裂素受体基因的表达，研究森林草莓叶片衰老中细胞分裂素受体基因和细胞分裂素的作用的研究。

5. 研究计划与进展

本次研究主要分为四个阶段：第一阶段（2017.3 - 2017.5）：确定课题和准备实验材料，繁殖野生型与转基因森林草莓。

第二阶段（2017.6 - 2017.9）：收集野生型与转基因森林草莓新鲜叶片，于不含有细胞分裂素的培养基上黑暗处理，拍照记录并取样测定叶绿素浓度、提取rna、定量pcr检测基因表达。

第三阶段（2017.10 - 2018.1)：收集野生型与转基因森林草莓新鲜叶片，于含有细胞分裂素的培养基上黑暗处理，拍照记录并取样提取rna、定量pcr检测基因表达。