拟南芥PLDδ调控花粉管伸长的分子细胞机制开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

pldδ在拟南芥的不同组织部位都有表达，但在花粉中的表达量是其他组织中的将近10倍，并且已确定pldδ在拟南芥花粉管中表达。

烟草悬浮细胞pldδ被认为是连接微管和质膜的微管结合蛋白，木聚糖酶和盐等刺激均能激活pldδ，促使pldδ与质膜分离，诱导微管解聚。

肌动蛋白能够结合和调控pldβ的活性，共同调控烟草花粉管微丝的伸长。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：1、利用激光共聚焦显微镜确定pldδ是否在花粉管中表达。

2、明确pldδ对拟南芥花粉管微管骨架的调控作用。

研究内容：1、利用荧光显微镜观察在同样的生长环境下拟南芥wt与突变体（pldδ-1、pldδ-2）的花粉管的长度等表型并进行比较。

3. 研究的方法与方案

研究方法：拟南芥的种植与培养、pcr、电泳、载体的构建亚克隆、拟南芥花粉的培养、拟南芥花粉微管的免疫荧光染色、普通显微镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜的使用。

技术路线：确定pldδ是否在花粉管中表达→pldδ的突变体和野生型的花粉管是否存在表型差异（免疫荧光染色）→观察微管形态→激光共聚焦实时观察野生型及突变体微管形态实验方案：1、利用荧光显微镜观察在同样的生长环境下拟南芥wt与突变体（pldδ-1、pldδ-2）的花粉管的长度等表型并进行比较。

2、测量拟南芥野生型wt、突变体（pldδ-1、pldδ-2）、回补材料(pldδcom-1、pldδcom-2)及过表达材料（pldδoe）的花粉管长度并进行数据统计分析。

4. 研究创新点

在萌发的花粉细胞中，细胞骨架基质具有特殊的组成。

大部分的肌动蛋白、微管蛋白结合因子，包括微管结合蛋白，拟南芥FIMBRIN5及VILLIN5均对细胞骨架的重排和花粉的萌发具有调节作用，而PLDδ是否具有这种调节作用或者类似于这种调节作用尚无科学依据。

5. 研究计划与进展

研究计划：2017.9~2017.11：将野生型wt、突变体pldδ-1、pldδ-2的花粉管进行免疫荧光染色，观察野生型及突变体花粉管中微管的分布、形态等方面是否有差别。

构建过表达载体plat52-pldδ-1300并侵染拟南芥野生型wt、构建观察微管载体plat52-yfp-map4-pmdc123并侵染wt、pldδ-1、pldδ-22017.11~2018.1：筛选出侵染及杂交纯合体进行表型观察及对其微管形态、进行实时观察。

2018.1~2018/6：查看文献，补充实验；整理实验数据，撰写论文。