水稻磷转运蛋白OsPHT1;3在磷素吸收、转运和再分配过程中的功能研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.课题意义磷是植物生长发育所必需的大量营养元素之一，广泛参与植物体内的生化合成、能量转移、信号转导等生化代谢过程。

植物从土壤中获取的磷素主要是无机磷酸盐形态（pi）,包括h2po4-、hpo42-和po43-三种形态其中无机正磷酸盐（h2po4-）最易被植物根系吸收，其主要是被植物根系细胞膜上的磷酸盐转运蛋白 (phosphate transporter) 吸收和运输到体内。

水稻是最重要的粮食作物之一，也是最为重要的模式植物之一。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标探究ospht1;3（ospt3）在磷素吸收、转运和再分配过程中的功能，为改善植物磷素高效利用并通过现代生物技术培育作物品种的现代分子育种技术提供理论基础。

2.研究的内容 （1）目标基因敲除及超表达材料的获得通过rnai技术构建沉默目标基因的二元表达载体以及通过强启动子融合目标基因orf构建超表达载体，再通过转基因技术获得目标基因rnai及超表达的转基因材料，再通过q-pcr检测目标基因表达量的改变，筛选出超表达效果和敲除效果好的转基因材料。

（2）目标基因敲除及超表达对同家族其他高亲和磷酸盐转运蛋白基因成员表达状况的影响通过rt-pcr或定量pcr方法检测同家族其他高亲和磷酸盐转运蛋白基因的表达情况，探讨水稻pt家族基因之间的相互关系。

3. 研究的方法与方案

1. 研究方法（1）遗传形状统计：m1代突变群体进行gus染色，根据gus活性结果以及孟德尔分离定律，确定突变类型。

（2）分子水平鉴定：提取rna并反转录，利用q-pcr方法验证内源ospt3基因的表达与外源gus基因表达是否一致。

（3）生理指标测定：m1代两个分离群体，在高低磷水平处理下，可提取磷（pi）含量是否有差异。

4. 研究创新点

以水稻粳稻（Oryza Sativa L. ssp. japonica）品种日本晴为研究材料。

PCR反应获得目的基因片段，连入pMD19-T Vector或pEASY-Blunt Cloning Vector，测序结果正确后，将目的基因片段酶切切下连入表达载体，转化大肠杆菌，提取质粒后验证正确，电转化入农杆菌，制备农杆菌侵染工程菌液，侵染水稻愈伤，进行组培实验获得转基因材料。

5. 研究计划与进展

2018年3月完成开题报告及文献综述2018年4月 上交中期报告2018年5月整理分析数据，完成论文撰写。