蚓粪中四环素及镉可培养抗性细菌的筛选鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（1）本课题的意义 近年来，环境中细菌抗药性基因（args）的产生和散播受到广泛关注。

其中，磺胺嘧啶（sd）和四环素（tc）作为代表性抗生素，在畜牧养殖中广泛使用。

同时，重金属也常作为饲料添加剂用以促进动物的生长，从而造成畜禽粪便及周边环境中多种重金属如铜、锌、镉的超标[1]。

2. 研究的基本内容和问题

（1）研究目标四环素与磺胺嘧啶作为两种常见的抗生素，在畜禽养殖业中被广泛运用；重金属镉作为饲料添加物的携带品常在饲料及畜禽粪便中被检出。

畜禽排泄物经蚯蚓处理得到的蚓粪，具有较高的农业利用价值，现已被广泛投入市场。

本实验通过筛选与鉴定南京周边地区蚓粪中耐镉和耐四环素或磺胺嘧啶的细菌单菌落，探究不同地区蚓粪的微生物菌落抗性情况，对今后各环境介质中微生物多重抗性的了解以及多重抗性的风险评价研究，提供必要的理论与数据支撑。

3. 研究的方法与方案

（1）研究方法1.1蚓粪中单菌落筛选1.1.1 培养基配制成分：10g胰蛋白胨(tryptone)、5g酵母提取物(yeast extract)、10g氯化钠(nacl)，另加琼脂粉 15g加双蒸水至1000ml, 用5mol/l naoh（约0.2ml）调ph至7.2，加入不同浓度氯化铬溶液，121℃灭菌30min。

配制方法：　　（1）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和nacl，置于烧杯中。

　　（2）溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。

4. 研究创新点

特色或创新之处1.以蚓粪中细菌为研究对象，分离其中对重金属镉和抗生素TC、SD具有抗性的细菌。

2.使用16S rRNA测序技术对细菌进行种类鉴定，并制作系统发育树。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2018.3.4~2018.3.19（两周） 完成开题报告、文献综述的提交 不同浓度梯度下磺胺嘧啶与重金属镉作用下的菌落培养2018.3.20~2018.4.5（约两周） 完成中期报告 磺胺嘧啶与重金属双重作用下的筛菌实验、16S rRNA测序、扫描电镜拍摄2018.4.6~2018.4.20（两周） 四环素与重金属作用双重作用下的筛菌实验、16S rRNA测序、扫描电镜拍摄2018.4.21~2018.5.5（两周） 系统发育树制作毕业论文初稿撰写