水稻维持磷稳态相关转录因子OsWRKY-P2互作蛋白的筛选与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

研究概况：水稻中有137个wrky家族转录因子成员。

wrky家族转录因子首次发现于1994年，经过20多年的研究，wrky转录因子己被证明参与到植物抵御生物及非生物胁迫、发育、种子休眠与萌发、衰老等众多过程中。

wrky转录因子的最主要结构特点是至少含有一个wrky结构域(wd)，其征序列为wrkygqk。

2. 研究的基本内容和问题

1. 研究目标本实验主要针对可能与oswrky-p2发生互作的两个wrky转录因子进行筛选和鉴定。

目的是进一步明确与磷相关转录因子oswrky-p2的互作蛋白。

2. 研究内容wrky转录因子已被报道可在翻译后水平与包括wrky家族其他成员在内的多种类型蛋白发生互作，如 vq 蛋白、mapk 蛋白激酶、染色质重塑蛋白、 钙调蛋白、 14-3-3蛋白、jazmonate-zim蛋白和aux/iaa抑制因子。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1.研究方法及方案（1）酵母双杂交使用载体：pad-gal4-2.1，原核抗性为amp，酵母转化时用sd-leu进行筛选pbd-gal4-cam，原核抗性为chl，酵母转化时用sd-trp进行筛选使用菌株：yrg-2和y2hgold酵母转化：利用clonetech酵母转化试剂盒，参照试剂盒步骤进行酵母转化。

（2）bifc 双荧光分子互补实验使用载体：pgtql1221yc，原核抗性为kana，基因orf融合yfp的c端pgtql1221yn，原核抗性为kana，基因orf融合yfp的n端使用菌株：根癌农杆菌eha105利用本氏烟草叶片表皮瞬时表达分析将oswrky-p2和oswrky-p3基因的orf与yfp分别在n端和c端融合表达，并将最终表达 载体转入根癌农杆菌eha105中。

将活化的农杆菌单克隆接种到含有相应抗生素 的yep液体培养基中，28℃、200 rpm过夜培养。

4. 研究创新点

3.实验可行性分析（1）有充分的前期实验基础在本实验前期，我们已经通过Y2H建库筛选出了若干可能与OsWRKY-P2发生互作的蛋白，基于前期充分的研究基础，我们再通过不同的方法和手段再进一步验证。

（2）有本课题所需的实验技术和成熟的研究方法本人所在实验室目前已经有成熟的酵母双杂交和双荧光分子互补实验的研究方法和技术，为本实验成功开展打下了坚实基础。

5. 研究计划与进展

特色或创新之处1.本课题基于实验室前期坚实的工作基础，通过酵母双杂体系建库而筛选出的若干候选基因，以及通过酵母双杂、bifc等不同的实验手段和方法进一步筛选和确定候选基因。

为后续实验提供有力依据。

2. 本实验所选择的候选基因与oswrky-p2为同一家族基因，同为转录因子，我们猜想其在功能上可能会与oswrky-p2发生冗余，若在蛋白水平发生互作，则能够为后续实验提供有力的实验依据研究计划及预期进展1.研究计划2018年3月15日-2018年3月20日 对已经获得候选基因进行生物信息学分析，oswrky-p2与互作蛋白的氨基酸序列的同源性分析和基因共表达分析。