菊花CmJAZ8基因的克隆和载体构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 研究意义：菊花(chrysanthemum morifolium)是我国十大传统名花和世界四大切花之一,具有观赏、食用、茶用、药用等多种价值。

目前通过光周期调节花期技术进行周年生产，并常年供应市场。

但由于菊花是短日照花卉，为周年生产而采取的春、夏季遮光和冬季补光等花期调控措施，造成大量的人力、物力和财力的浪费，制约了菊花产业快速发展。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究方案1.1项目研究的目标、内容1.1.1目标：本项目拟克隆基因cmjaz8，并构建表达载体，以便他人研究jaz8基因在菊花中的调控模式，探索ja在菊花内的影响，为菊花花期调控和抗虫性研究奠定基础，同时为其他花卉提供相关的理论基础。

1.1.2内容：（1）目的基因cmjaz8的克隆（2）进行载体构建，把连接好的dna分子运送到受体细胞中去1.2拟解决的关键问题克隆基因的目的在于保存稀缺目的基因、提供研究材料、用作基因工程原料和使得目的基因在稳定的存在且能自我复制和表达。

所以我们要解决的关键问题如下：（1）在克隆载体合适的位置必须含有允许外源基因插入的克隆位点，并且这样的克隆位点应尽可能的多。

3. 研究的方法与方案

2.研究方法及实验方案本实验是要克隆目的基因cmjaz8，构建表达载体，导入菊花优香的受体细胞中并使其稳定的遗传转化，从而利于研究cmjaz8基因在菊花内的调控机理。

2.1.1 目的基因的扩增2.1.1.1 pcr反应体系(a), (b), (c):试剂 体积10xpcr buffer (with mg ) 5μldntps @ 2mm 5μleach oligo @10μm 2μlplasmid dna (1:100) 2μlpfu 0.5μlddh2o 33.5μlpcr反应程序为：95c变性 2min；95c变性30秒；55c退火30秒；72c延伸40秒；大于24个循环；72c延伸7分钟。

2.1.1.2 pcr反应体系(d):试剂 体积10xpcr buffer (with mg ) 5μldntps @ 2mm 5μloligo a @ 10μm 2μloligo b @ 10μm 2μl pcr (a) 0.5μl pcr (b) 0.5μlpcr (c) 0.5μlpfu 0.5μlddh2o 34.5μlpcr反应程序为：95c变性 2min；95c变性30秒；55c退火30秒；72c延伸1分30秒；大于24个循环；72c延伸7分钟。

4. 研究创新点

特色或创新之处：（1）截至目前，还未有文章显示在菊花中研究过jaz家族，茉莉酸调控菊花花期亦未有研究成果出现。

（2）本项目是对菊花cmjaz8基因的克隆及遗传转化，是首次进行jaz8基因克隆与载体构建并导入菊花中。

（3）本研究可望在国内外首次研究菊花中cmjaz8基因作用，并应用于生产实践。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展：1.项目研究计划（1）克隆目的基因（2）进行琼脂糖凝胶电泳 （3）回收目的片段并进行连接反应，将目的片段导入农杆菌并保存（4）将目的基因导入受体细胞（5）脱羧培养，选择培养，然后继代培养，最后生根培养得到所需植株（6）进行DNA分子杂交直接检测受体细胞、mRNA（7）对蛋白质进行抗原-抗体杂交（8）直接对个体进行检测，观察其性状2.预期进展（1）2017年11月~2018年3月：克隆目的基因（2）2018年3月~4月：构建表达载体