砀山酥梨’细胞悬浮培养体系的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

植物细胞培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导产生愈伤组织或潜伏芽，或长成完整的植株的技术[1]。

细胞悬浮培养是指通过搅动或摇床转动对液体培养基中单细胞或小细胞团进行培养的一种离体培养方式[2]。

植物细胞培养的核心是细胞全能性理论，即植物的任何一个细胞都包含有整株植物全部的遗传信息，在一定的条件下具有发育成一个完整植株的能力[3]。

2. 研究的基本内容和问题

一.研究目标砀山酥梨果实组织的诱导及稳定的细胞悬浮体系的建立。

二.研究内容1. 外植体消毒方法的选择2. 梨果实愈伤组织诱导培养基的筛选3. 抗褐化剂浓度对梨果实愈伤组织诱导的影响4. 继代培养基的筛选5. 梨果实细胞悬浮体系的建立方法三.拟解决的关键问题1. 外植体消毒方法对愈伤组织诱导的影响2. 梨果实愈伤组织初代培养基的确定3. 不同浓度Vc对梨果实愈伤组织诱导的影响4. 不同激素种类及浓度对梨果实继代培养的影响5. 梨果实细胞悬浮体系的初步建立

3. 研究的方法与方案

1.1 试验材料试验场地为江苏省高邮市果树实验场50年生的砀山酥梨果园，选取树势强壮、生长发育正常、田间管理水平良好、没有经过任何处理的砀山酥梨果树。

试验材料为盛花期后21d-35d的幼果，选取无病虫害、发育正常的幼果置于冰盒中，当天运回实验室，于在4℃冰箱内保存，保存时间不超过两个周。

1.2 梨果实愈伤组织的诱导与继代培养选取健康、无损坏的砀山酥梨幼果用5%的洗洁精漂洗3-5min，清除杂质，用蒸馏水清洗3遍。

4. 研究创新点

在田间处理时，存在多种因素影响结果，很难控制单一影响因素。

但是，植物离体愈伤组织系统可以严格控制培养基与培养条件，形成较为稳定的实验系统，使在任何时间研究某单一因素成为可能。

同时，通过建立梨细胞悬浮体系可以获取有活性的单个细胞，使利用荧光指示剂结合激光共聚焦显微技术或者ccd(charge coupled device)摄像技术进行细胞质内钙离子动态成像活动成为可能。

5. 研究计划与进展

2017年4月中旬-5月底梨幼果愈伤组织初代培养2017年5月底-9月底愈伤组织继代培养2017年9月底-2018年5月细胞悬浮体系合适方案筛选