传统烟熏肉制品中的PAH4与甲醛相关性研究开题报告

全文总字数：9523字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1 本课题的意义

2. 研究的基本内容和问题

2.1 研究目标

①找到烟熏肉制品中多环芳烃和甲醛在形成机理以及影响他们生成的因素的关联，研究出二者在含量上的相关性。

②为控制烟熏肉制品中有害物质多环芳烃和甲醛提供一定的理论依据。

3. 研究的方法与方案

3.1 研究方法

3.1.1多环芳烃含量的测定：

采用《GB 5009.265-2016 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定》

3.1.2 甲醛含量的测定

采用《N/T 1547-2011 进出口食品中甲醛的测定 液相色谱法》（由于该法于2017年12月废止，且到2019年3月为止未颁布新的有关检测方法，故仍延用该法，同时结合参考汪敏与靳红果的实验方法进行检测）

3.1.3 统计分析

运用SPSS 22.0统计软件，通过Pearson’s correlation coefficients法对甲醛和多环芳烃的含量进行相关性分析。采用Matlab2016a统计软件对数据进行拟合并作图。

3.2 技术路线

见附件1

3.3实验方案

1.选取具有代表性的熏鸡品种

2.检测

①多环芳烃

A).检出限和定量限

当试样取4g，定容体积为1ml时，本方法的检出限和定量限见表1。

表1 液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限

单位为毫克每千克

B).制取试样待测液

称取1g~4g(精确至0.01g)试样于50ml具塞玻璃离心管A中,按以下步骤处理:

a).加人20 mL乙腈和10 mL乙腈饱和的正已烷,涡旋振荡30 s后,放人40 C水浴超声30 min;

摇匀后,以4 500 r/min冷冻(一4 C)离心5 min,吸取下层乙腈层于100 mL鸡心瓶中,离心管A中溶液用20 mL乙腈重复提取1次,提取液合并于鸡心瓶中,35 C减压旋转蒸发至近干。加入5 mL正已烷,涡旋振荡30 s溶解。

b).依次用5 mL二氯甲烷和10 mL正已烷活化弗罗里硅土固相萃取柱,将a)获得的5 mL提取样液全部移入弗罗里硅土固相萃取柱,再用5 ml.正已烷洗涤鸡心瓶并入柱中,用8 ml.正已烷-二氯甲烷混合溶液洗脱,收集所有流出物于20 mL玻璃离心管B中。氮吹(温度控制在35 C以下)除去溶剂,吹至近干,加人0.5 ml乙腈涡旋振荡10 s,继续氮吹至除尽正已烷二氯甲烷,用乙腈定容至1mlL,混匀后,过0.22μm有机相型微孔滤膜.制得试样待测液。

C).高效液相色谱条件：

a)色谱柱:PAH C18反相键合固定相色谱柱，柱长250 mm，内径4.6 mm,粒径5 m，或同等性能的色谱柱

b)检测器:荧光检测器

c)流动相:乙睛和水;梯度洗脱程序见表1，溶剂A为乙睛，溶剂B为水。

反相C18柱梯度洗脱程序

表2 梯度洗脱程序

d)流速:1.5 mL/min

e)检测波长:激发和发射波长

表3 PAH4的激发波长、发射波长及其切换色谱检测时间参数

f)柱温:30℃

g)进样量:20

D).标准曲线的制作

将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中.测得相应的峰面积,以标准工作液的质量浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。

E).试样溶液的测定

将试样待测液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,测得相应的峰面积,根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围,可适当;稀释后测定。

F).空白试验

空白试验除不加试样外,采用与试样完全相同的分析步骤。

G).计算

X_i=(ρ_i×V×1000)/(m×1000)

其中，

X_i—试样中多环芳烃的含量(μg/kg)

ρ_i—依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃i的浓度(ng/mL)

V—试样待测液最终定容体积(mL)

m—试样质量(g)

②甲醛

A).提取

称取试样2.0g试样(准确至0.01 g)，置于50 ml具塞塑料离心管中，准确加入20.0 ml衍生液(量取100 ml的乙酸钠缓冲溶液和100 ml，0.6g/L的2.4-二硝基苯肼溶液,混匀)。 旋紧塞子，涡旋混匀后置于60 C恒温振荡器中，150 r/min振摇,间隔20 min取出混匀1次，振摇1h后取出冷却至室温

B).净化

在提取液中加人5 ml.乙情饱和的正已烷，涡旋混合，离心，弃去上层正已烷以不低，于4000 r/min离心5 min。再过0.45μm的有机相微孔滤膜后,供HPLC测定。

C).甲醛衍生物标准溶液的制备

移取20 μL.50 μl、100 pL、200 pL,500 μl甲醛标准溶液(100μg/ml),置于10 ml.具塞比色管或刻度试管中,补加缓冲溶液至5.0mL,再用2,4-二硝基苯肼溶液定容至10.0 mL,盖上塞后混匀，60C水浴加热1h,取出冷却至室温。过0.45 pm的有机相微孔滤膜，滤液供HPLC测定。

D).测定

液相色谱条件

a)色谱柱:C18柱，250 mm×4.6 mm(内径)，5 μm

b)流动相:甲醇-水(70 30，V₁ V₂）

c)流速:1.0 ml./min

d)柱温: 40 ℃

e)检测波长:365 nm

f)进样量:20μl

根据样液中甲醛衍生物浓度的情况选定條面积相近的标准溶液系列。以峰面积为纵坐标,甲醛衍生物标准容液对应的甲醛浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。用保留时间定性,外标法定量。在上述色谱条件下甲醛衍生物的保留时间为6.5min

E).空白试验

除不加试样外,均按上述操作步骤进行。

F).计算

X=(c×V×1000)/(m×1000)

其中，结果需扣除空白值

X—试样中甲醛含量（mg/kg）

c—从标准工作曲线所得的样液对应的甲醛浓度（mg/L）

V—样液最终定容体积（mL）

m—样液所代表的试样质量（g）

G).低限:5.0mg/kg

③数据分析

根据PAH4与甲醛的标准色谱图，对样品图谱进行分析。通过标准曲线的建立，得出对每组样品中的多环芳烃和甲醛的含量，再对二者进行相关性分析，拟合出相关曲线，得出结论。

3.4可行性分析

南京农业大学食品科技学院具备本项目研究工作所需的实验室与相关设备，能够承担本项目中烟熏产品的购置与加工制备，国家肉品质量安全控制工程技术研究中心能够承担相关理化分析及检测等研究工作，为本项目的研究工作提供先进的研究平台。

所在课题组长期从事烟熏产品的相关研究，积累了丰富的科研经验，相关技术应用纯熟，能保证本研究的顺利进行。

本人在大学期间相关课程的学习中努力，学到了较为丰富的理论知识,而且还在长期的实验中积累了扎实的实验功底。通过广泛阅读文献，对课题进展有相当的把握。且本人认真负责,对该实验课题非常感兴趣,所以对按计划高质量完成该实验充满信心.

指导老师张雅玮副教授的主要研究方向为畜产品加工与质量控制。本研究将在张雅玮副教授直接指导下进行，加上本人的不懈努力，一定可以按期完成本项目的研究工作。

4. 研究创新点

①采用科学有效、准确实用的食品中多环芳烃和甲醛检测方法。

②旨在研究国内外现阶段无人研究的多环芳烃和甲醛在含量上的相关性，为找出控制多环芳烃和甲醛在烟熏肉制品中的含量的手段提供一定的理论依据。

5. 研究计划与进展

5.1 研究计划

本项目研究期限为半年,即从2018年12月—2019年6月

表4 本课题研究计划

5.2 预期进展

①确立最有效，适合本实验的的食品中多环芳烃和甲醛含量检测方法各一种。

②了解多环芳烃和甲醛在形成机理以及影响他们生成的因素的关联。

③研究出多环芳烃和甲醛在含量上的相关性。

③为找到控制多环芳烃和甲醛在烟熏肉制品中的含量的手段提供一定的理论依据。

④完成结题论文一份