牛源性沙门氏菌耐药性分析研究开题报告

全文总字数：4143字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：

通过对沙门氏菌耐药性的检测，可以继续提供数据以探究沙门氏菌的耐药机制，有助于我们对沙门氏菌感染采取合理的干预措施，并为科研机构研制新型抗菌药物和抗菌佐剂提供借鉴，可以为我国食源性疾病地诊断和治疗提供理论和实践依据。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标：

74株牛源沙门氏菌，其中：5株牛胴体提取菌，35株牛肛提取菌，34株牛肉提取菌

3. 研究的方法与方案

纸片扩散药敏试验原理:

将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

菌株获取：

将-80℃保存的沙门氏菌置于4℃冰箱解冻后，于XLD选择性培养基进行划线培养16h-18h，沙门氏菌呈粉红色或乳白色菌落，有或无黑色中心。

菌液制作：

挑取XLD培养基上的单菌落沙门氏菌接种至4mlTSB肉汤中，培养过夜后放入4℃冰箱待用。

生长法：

从4℃保存菌液中吸取50ul菌液接种到4mlTSB肉汤中，在37℃培养4-6h。在无菌生理盐水中调整新鲜生长的肉汤悬液的浊度到0.5麦氏浓度。

接种平板：

调整好悬液的浊度后将无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体后用拭子划线整个琼脂表面，接种于表面干燥的MHA平板，重复两次此过程。每次旋转平板约60度以确保每次接种均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈。盖子可半开3-5min，但不超过15min，以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分。

纸片在已接种的琼脂平板上的放置：

将预先设定的一组抗菌药物纸片分置在已接种细菌的琼脂表面。每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触。纸片分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24mm。直径100mm的平板不超过6个，150mm的平板不超过12个。

孵育：

15min内倒置琼脂板并将它放置在37℃培养箱中，16-18小时后检查平板。

测量：

测量完全抑制区的直径，由肉眼来判断，包括纸片的直径。 测量抑菌环至最接近的整毫米数，采用游标卡尺或尺子在培养板的背面测量。

质控菌株：

使用ATCC-25923：金黄色葡萄球菌。质控菌的目的就是为了在微生物检测中进行质量控制，用来检测培养基是否合格、是否能培养出目标菌、并且目标菌在该培养基上表现出的符合正常情况的特征符合。为了保证某方法所用试剂、操作过程等无误，也应设立一个质控菌，如果用该方法检测质控菌合格，那么这个方法就是有效的。在药敏试验种，标准菌株与待测菌同时培养，如果标准菌株表现出的耐药性正常，那么这次药敏试验的结果才是可靠的。

判读标准：

CLSI2017版：

以下S代表敏感；I代表中介或剂量依赖性敏感；R代表耐药（以下数值单位均为mm）

ATCC25923抑菌圈质控范围如下：

对于本课题所选用的抗生素，抑菌圈直径判定标准如下：

可行性分析：导师王虎虎副教授具有相当丰富的实验室经验和指导经历，可以对本实验进行很好的指导，国家肉品质量安全控制工程技术研究中心可以提供实验所需试剂、器械及场所，所以本课题可行性很高。

4. 研究创新点

特色或创新之处：国内外专家学者近几年已经对肉食类动物源的沙门氏菌进行了多项研究，并且取得了一定成果，但是对牛的沙门氏菌病研究报道较少，对于我国现在的养牛业的持续发展没有足够的研究来进行有效的支持，所以本课题对牛源沙门氏菌进行了耐药性的检测，期待能够对国内的牛养殖业健康发展产生积极的帮助作用。

5. 研究计划与进展

研究计划：

2018.12-2019.01：进行沙门氏菌耐药性相关文献的整理和阅读学习，向导师咨询实验方向、细节并完成菌株的交接和实验所需试剂的预订