鸡蛋膜源抗炎活性肽的筛选与活性研究开题报告

全文总字数：5549字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

炎症是人体在受到外来抗原、微生物及有害物质的侵害，造成内在损伤后所诱发得一种应激反应。炎症是人体免疫系统的一种自我修复，但其同时也对人体细胞造成损伤。为了减少炎症对于细胞的损伤，可采用抗炎肽减轻炎症反应。^[1]

研究发现食源性活性肽具有良好的生物活性、食用安全性高^[2]，可以调节人体免疫能力，促进人体受损细胞自我修复，具有一定的抗炎和抗氧化功能^[3-4]。目前已经陆续从大豆、柑橘、苋菜等多种植物性食物中分离得到天然抗炎肽，也从牛奶、鸡蛋、鹿茸等多种动物性食物中分离得到了天然抗炎肽。它们通过抑制炎症因子减少tnf-α分泌，抑制内毒素（如lps）活性，调节免疫功能等方式达到抗炎的效果^[5]。

如从牛奶中提取的三肽vpp、ipp可以缓解与动脉粥样硬化相关的炎症^[1],从大豆中提取的多肽lunasin可以抑制no与peg2的产生从而抑制炎症的产生^[6]，从玉米醇溶蛋白水解物中提取的多肽可以抑制tnf-α诱导产生的血管内皮细胞粘附因子 vcam-1的表达而减轻血管内细胞炎症^[7]。鸡蛋作为一种常见的食物，其中许多成分也具有抗炎作用。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标：

利用体外培养的肠道细胞或免疫细胞进行炎症诱导，探究鸡蛋膜源肽对于炎症反应的抑制作用，并从数种鸡蛋膜源肽中筛选抗炎活性较高的抗炎肽，研究其抗炎活性大小及作用机制。

3. 研究的方法与方案

研究方法：

①细胞活化与冻存采用速融慢冻的方法，从液氮罐中取出的细胞在37℃水浴条件下迅速化冻进行培养，而细胞进行冻存时先在4℃放置半小时，然后于-20℃放置2小时，再于-80℃放置2到4小时，最后转移到液氮罐中。

②细胞活力测定采用mtt法。

4. 研究创新点

①通过检测不同浓度诱导剂在不同孵化时间下细胞il-8的分泌含量构建细胞炎症诱导模型。

②利用鸡蛋膜源肽处理炎症细胞，研究其抗炎活性，筛选出抗炎活性较高的鸡蛋膜源肽。

③鸡蛋膜源抗炎肽的作用机理研究。

5. 研究计划与进展

2019年3月：细胞的活化、传代以及冻存。并将一部分传代细胞进行铺板，利用lps与tnf-α诱导细胞产生炎症，测定炎症细胞的细胞活力以及细胞分泌的il-8含量，并建立与lps、tnf-α的浓度及孵化时间相关的炎症诱导模型。提交开题报告。

2019年4月：将一部分传代细胞进行铺板及炎症诱导，利用不同浓度的鸡蛋膜源肽对炎症细胞进行处理后测得细胞活力以及细胞分泌的il-8含量，进而得到不同浓度的鸡蛋膜源肽对于炎症细胞的影响，筛选出抗炎活性较高的鸡蛋膜源肽。整理汇总所得数据，提交中期报告。

2019年5月：研究抗炎活性较高的鸡蛋膜源肽在不同浓度与不同孵化时间下对于炎症细胞的影响，并研究鸡蛋膜源抗炎肽的抗炎机理。整理汇总所得数据，查阅相关论文后撰写论文并准备毕业答辩。