硫酸转移酶的研究进展开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

天然来源的硫酸化糖类大多来自于海洋生物，如岩藻聚糖硫酸酯、卡拉胶（硫酸半乳聚糖）、海胆多糖、海藻多糖、海洋硫酸鼠李糖等，具有独特的结构和聚阴离子的性质，在抗炎、抗凝血，抗氧化、抗病毒、增强免疫，以及肿瘤辅助治疗等方面发挥巨大作用。

硫酸转移酶是酶法合成硫酸寡糖的重要工具酶，然而大多数硫酸转移酶都存在于真核生物细胞内，原核表达存在表达量低、表达产物为包涵体、表达产物没有活性等问题，因此硫酸转移酶的原核表达是生产硫酸寡糖过程中非常重要的步骤。

本研究选择2-o-硫酸转移酶（2-ost）作为研究对象，旨在寻找到最适合进行原核表达的2-ost基因，并选择合适的原核可溶表达策略构建质粒使其表达，同时采用合适的方式对2-ost进行纯化，探究2-ost的酶学性质表征。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究问题：大多数硫酸转移酶都存在于真核生物细胞内，原核表达存在表达量低、表达产物为包涵体、表达产物没有活性等问题，因此硫酸转移酶的原核表达是生产硫酸寡糖过程中非常重要的步骤。

本研究选择2-o-硫酸转移酶（2-ost）作为研究对象，旨在寻找到最适合进行原核表达的2-ost基因，对基因进行密码子优化，以便进行原核表达；选择合适的原核可溶表达策略，构建质粒并表达；同时采用合适的方式对2-ost进行纯化，得到纯度高活性不损失的纯酶；对酶活、酶活回收率、比活等酶活参数进行测定，并初步探究最适反应温度和ph。

研究手段：用不同的的蛋白标签来构建质粒，进行密码子优化，并用pcr增殖，然后将质粒植入载体，转入大肠杆菌中，然后接种到含一定量的蛋白合成抑制剂的lb培养基培养。