UDP-葡萄糖脱氢酶基因克隆、表达与纯化开题报告

 2021-08-14 18:33:10

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1.udp-葡萄糖脱氢酶

udp-葡萄糖脱氢酶(udp-glcdh)是透明质酸合成过程中关键的限速酶,可以将udp-葡萄糖催化生成透明质酸必需的前体物质udp-葡萄糖醛酸。分别采用大肠杆菌bl21(de3)和yk537 的基因组dna 为模板,通过pcr 获得bl21(de3)和yk537 的udp-glcdh 基因ugd,并采用分子生物学方法分别将两种菌株的ugd 基因插入含有pl 启动子的pblmvl2 载体中,分别获得重组质粒pblbugd 和pblyugd,再分别转化于大肠杆菌bl21(de3)和yk537 中,获得4 株重组菌;采用升温诱导表达udp-glcdh,并测定不同重组菌株的udp-glcdh 的活性,探索出不同温度诱导条件下udp-glcdh 的表达量及活性差异。

1.1葡萄糖脱氢酶的酶学研究

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究目的:

udp-葡萄糖脱氢酶(udp-glcdh)是透明质酸合成过程中关键的限速酶,可以将udp-葡萄糖催化生成透明质酸必需的前体物质udp-葡萄糖醛酸。分别采用大肠杆菌bl21(de3)和yk537 的基因组dna 为模板,通过pcr 获得bl21(de3)和yk537 的udp-glcdh 基因ugd,并采用分子生物学方法分别将两种菌株的ugd 基因插入含有pl 启动子的pblmvl2 载体中,分别获得重组质粒pblbugd 和pblyugd,再分别转化于大肠杆菌bl21(de3)和yk537 中,获得4 株重组菌;采用升温诱导表达udp-glcdh,并测定不同重组菌株的udp-glcdh 的活性,探索出不同温度诱导条件下udp-glcdh 的表达量及活性差异。

研究手段:

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