1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
一、前言
l-天冬氨酸酶（l-aspartase，ec4.3.1.1）是一种重要的工业用酶，用于催化富马酸和氨生成l-天冬氨酸[1,2]。l-天冬氨酸是合成甜味剂阿斯巴甜的原料，在食品、医药、化工领域有重要用途，市场需求巨大[3]。来自大肠杆菌(e.coli)中的天冬氨酸酶由aspa基因编码，基因全长1437bp，编码478个氨基酸残基。大肠杆菌菌体亦有富马酸酶（fumabc）利用富马酸生成苹果酸。国外关于天冬氨酸(asparticacid)的研究自80年代以来,已报道了很多并开展了生产工艺的研究以及在生产上的应用等。但由于大肠杆菌生产天冬氨酸酶的作用机制上存在的问题，鲜有关于构建大肠杆菌天冬氨酸高效生产菌株的报道。本文旨在从基因工程和代谢工程两方面构建大肠杆菌天冬氨酸高效生产菌株。实验以大肠杆菌基因组dna为模板，用pcr方法扩增天冬氨酸酶基因，并将其重组于pet28a载体中，重组质粒转化大肠杆菌表达宿主，设法通过提高基因拷贝数提高天冬氨酸酶活性，探索酶基因工程的新方法。在实际生产天冬氨酸过程中，发现伴随着苹果酸的出现。针对这一现象，利用red同源重组敲除富马酸酶的基因，以达到构建高产菌株的目的。
二、研究内容
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
需研究和解决的问题：
1.构建表达天冬氨酸酶基因的质粒
2.将构建成功的质粒导入发酵性能良好的菌株bl21中
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