包载DOX聚（γ-谷氨酸）载药胶束的细胞摄取研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

一．目的及意义

恶性肿瘤化疗是非常传统的实体肿瘤的治疗方法，该方法关键是让肿瘤细胞在充分地接触药物。并且，常用的抗癌药物有阿霉素、紫杉醇、喜树碱等，这些抗癌药物的溶解度差和生物利用度低，同时也不具靶向作用。综合来说，这些抗癌药物的利弊各占一半。为了解决这一难题，靶向制剂成为研究的潮流。聚(γ-谷氨酸）最为受欢迎，因为聚(γ-谷氨酸是由d-谷氨酸和l-谷氨酸通过α-氨基和γ-羧基形成的酰胺键连接而成的，并具有以下优点：1.纯天然的氨基酸聚合物；2.分子量在10-10之间，可降解为内源性谷氨酸，不会有毒副作用；3.具有较强的亲水性和吸水保水性；4.具有可修饰性，通过接枝分子，改善亲水性；5.具有一定的增强细胞摄取多的功能。

同时化学合成类脂肪族聚酯聚丙交脂在体内通过水解方式降解成乳酸，再进入三羧酸循环，可以代谢成水和二氧化碳，经呼吸和尿排到体外，对机体无毒性，可以完全降解吸收。聚丙交脂的结构很多，左旋聚丙交脂（poly-l-lactide）最为合适。

本课题旨在研究包载dox聚(γ-谷氨酸)载药胶束的细胞摄取情况。首先制备该载药胶束：先通过微波降解的方法将大分子量的γ-谷氨酸变成小分子量的γ-谷氨酸，再以l-丙交脂为原料，辛酸亚锡为催化剂。boc-氨基丙醇为引发剂，得到boc-氨基保护的plla,通过三氟乙酸作用得到氨基封端的plla,最后，在edc和dmap的作用下，将氨基封端的plla接枝到γ-pga的侧链基上，就得到γ-pga-g-plla.再让该聚合物在水溶液自组成胶束，最后将阿霉素包载胶束，即得到载药胶束。接着，将载药胶束投入培养的细胞的培养基，一段时间后，通过显微镜检测，用紫外分光光度计测定阿霉素的吸光度，再计算出其含量，就可得出细胞摄取情况。

2. 研究的基本内容与方案

一、基本内容

本课题旨在于研究包载dox聚(γ-谷氨酸)载药胶束的细胞摄取情况。包括细胞的培养和包载dox聚(γ-谷氨酸)载药胶束的制备。首先是细胞培养：将bel7402细胞接种在两个6cm的培养皿上，每个培养皿6×106个细胞，培养皿加入5ml培养基进行培养。铺好的6cm培养皿置于37摄氏度，二氧化碳浓度为百分之五的培养箱中培养24h。待用。然后是包载dox聚(γ-谷氨酸)载药胶束的制备：先通过微波降解的方法将大分子量的γ-谷氨酸变成小分子量的γ-谷氨酸，其作为亲水段；再以l-丙交脂为原料，其作为疏水端；辛酸亚锡为催化剂。boc-氨基丙醇为引发剂，得到boc-氨基保护的plla,通过三氟乙酸作用得到氨基封端的plla。最后，在edc和dmap的作用下，将氨基封端的plla接枝到γ-pga的侧链基上，就得到γ-pga-g-plla。再让该聚合物在水溶液自组成胶束，最后将阿霉素包载胶束，即得到载药胶束。通过控制聚合反应原料的投料比，可制备出不同分子量的pla（d型和l型）。最后，细胞对该载药胶束摄取情况研究：将载药胶束定量投入培养好的细胞中，然后通过紫外分光光度计测量吸收度，再计算浓度。

主要包括以下方面：

（1）定性研究：在倒置荧光显微镜的观察下，通过观察细胞内dox的荧光强弱，辨别在dox胶束进入细胞内含量的大小；

（2）定量研究：利用酶标仪，测定进入细胞内的dox的含量；

3. 研究计划与安排

进度安排：

第二~五周：了解课题背景，熟悉课题内容，阅读有关中外文献，并完成开题报告；

第六周：准备实验材料和细胞培养；

4. 参考文献（12篇以上）

[1]baroukir,finidorij,chobertmn,etal.biosynthesisandprocessingofgammaglutamyltranspeptidaseinhepatomatissueculture[j].journalofbiologicalchemistry,1984,259(12):7970-7974.

[2]han l,hiratakej,kamiyamaa,etal.design,synthesis,a-

nd evaluationofγ-phosphono diester analoguesofglutamatea-

naloguesofglutamateashighlypotentinhibitorsandactive