生产D-苯基乳酸基因工程菌的构建开题报告

1. 研究目的与意义

苯乳酸是一种新型的天然防腐剂，同时与丹参素具有相同的药效。

采用简便快速的方法合成苯乳酸具有非常重要的意义。

本研究旨在利用大肠杆菌外源表达改造过的乳杆菌中的d-乳酸脱氢酶将苯丙酮酸还原成d-苯基乳酸。

2. 国内外研究现状分析

目前国内外文献报道的pla的生产过程，所得pla均为d-型和l-型两种异构体的混合物，高光学纯pla单体在化工、医药和食品领域都具有重要的应用价值。

以ppa为底物通过立体选择性还原获得手性d-pla，原料来源丰富，操作简单。

基于上述考虑，本课题以手性d-pla的生物催化法生产为研究目标，以ppa为出发底物，建立生物催化法催化ppa生产d-pla的操作工艺，具有重要的应用价值。

3. 研究的基本内容与计划

（1）将前期工作中获得的改造后的d-乳酸脱氢酶基因片段插入到表达载体petduet-1上，同时将甲酸脱氢酶（formate dehydrogenase, fdh）也插入到表达载体petduet-1上以备提供该反应所需要的还原力nadh，重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)，获得用于催化ppa生产d-pla的生物催化剂。

用iptg诱导表达，检验目的蛋白的表达情况及活力水平。

（2）利用构建好的基因工程大肠杆菌全细胞催化体系，转化ppa生产d-pla，优化生物催化过程各具体参数，包括ph、温度、转速、底物浓度等。

4. 研究创新点

苯乳酸(phenyllactic acid，pla)，也称3一苯基乳酸或 一苯乳酸，即2一羟基一3一苯基丙酸，是近年来发现的一种新型天然防腐剂 。

苯乳酸抑菌谱宽，能抑制多种食源性致病菌、腐败菌，特别是能抑制真菌污染；溶解性好，易于在食品体系中扩散；稳定性高，具有宽广的ph 范围和热稳定性，在食品工业中具有广阔的应用前景。

3一苯基乳酸是丹参素的衍生物，与丹参素的药理作用相同，具有体外抗血小板聚集活性 ，防治缺血性心脏病 ，调节人体类固醇水平 ，还可用于合成苯丙氨酸 ，合成治疗干燥皮肤的乳膏或制剂 ，及合成抗hiv 试剂等.